SN_T 4419.7-2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法 第7部分：巴西坚果.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.7—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第7部分：巴西坚果Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 7 : Brazil nut2016-03-09发布2016-10-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4419.7—2016前 創言SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成：第1部分：开心果；第2部分：腰果；第3部分：胡桃；第4部分：榛果；-第5部分：杏仁；第6部分：扁桃仁；第7部分：巴西坚果；第8部分：澳洲坚果；第9部分：栗子；第10部分：大豆；第11部分：羽扇豆；第12部分：花生；第13部分：葵花籽；第14部分：芝麻；第15部分：大麦；第16部分：小麦；第17部分：荞麦；第18部分：芥末；第19部分：胡萝卜；第20部分：芹菜；第21部分：牛奶；第22部分：虾。本部分为SN/T4419的第7部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：高东微、刘津、李志勇、陈源树、陈颖、李婷、席静、刘青、关丽军。A SN/T 4419.7—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法　第7部分：巴西坚果1范围SN/T4419的本部分规定了食品中过敏原巴西坚果成分的环介导等温扩增（LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原巴西坚果成分的定性检测。本部分所规定方法最低检测限（LOD)为0.5%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1过敏原原 allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2巴西坚果Brazil nut巴西坚果又名巴西栗、巴西果，是玉蕊科巴西栗属植物Bertholletiaercelsa的可食用种仁。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate）LAMP环介导等温扩增（loop-mediated isothermalamplification）TritonX-100聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定。55方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用巴西坚果2S白蛋白基因特异性检测引物进行1 SN/T 4419.7—2016LAMP扩增，通过颜色变化观察判定是否存在过敏原巴西坚果成分。6LAMP检测方法6.1原理根据巴西坚果2S白蛋白基因序列设计特异性内引物、外引物和环引物各一对，特异性识别靶序列上的6个独立区域，在链置换型BstDNA聚合酶的作用下启动循环链置换反应，在特异靶序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg²+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加入显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。显色液显色原理：SYBRGreenI是一种高灵敏的DNA荧光染料，可以嵌入方式结合到双链DNA的小沟内。当它与双链DNA结合时，荧光信号是游离状态的800～1000倍。在不发生扩增反应时，SYBRGreenI染料分子的荧光信号不发生改变，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链DNA的增加，SYBR染料的荧光信号也随之大幅度增强，其信号强度可代表双链DNA分子的数量，同时颜色由橙色变为绿色。6.2仪器和设备6.2.1万水浴锅或加热模板：63℃±1℃和80℃土1℃。6.2.2离心管:0.1mL、1.5mL。6.2.3计时器。6.2.4移液枪：量程0.5μL～10μL、量程10μL～100μL、量程100μL～1000μL。6.3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。6.3.1实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格。6.3.2 CTAB 提取缓冲液(20 g/L CTAB,1.4 mol/L NaCl,0.1 mol/L Tris-HCl,0.02 mol/L Naz