食用菌中凝集素的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

ICS 65.020.99 B20 中华人民共和国国家标准 GB/T XXXXX—XXXX 食用菌中凝集素的测定 高效液相色谱法 Determination of lectin in fungi by HPLC （征求意见稿） XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施 中华人民共和国国家市场监督管理总局 发 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 布 GB/T XXXXX—XXXX 食用菌中凝集素的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了基于高效液相色谱法的食用菌中凝集素的测定方法的范围、规范性引用文件、原理、 试剂和材料、仪器和设备、食用菌中凝集素的测定方法、结果计算与表示、精密度。 本标准适用于食用菌中凝集素的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中菌菇凝集素经硫酸铵沉淀、超滤富集后，高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定 量。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T 6682 中一级水的要求。 4.1 乙腈（C H N ）：色谱纯 2 3 4.2 三氟乙酸（C HO F ）；分析纯 2 2 3 4.3 硫酸铵（(NH ) SO ）：分析纯 4 2 4 4.4 十二水合磷酸氢二钠（NaHPO .12H O ）：分析纯 4 2 4.5 二水合磷酸二氢钠（NaH PO .2H O ）：分析纯 2 4 2 4.6 磷酸氢二钠溶液（0.02mol/L ）：1L 水中加入7.16 g 十二水合磷酸氢二钠 4.7 磷酸二氢钠溶液（0.02mol/L ）：1L 水中加入3.12 g 二水合磷酸二氢钠 2 GB/T XXXXX—XXXX 4.8 磷酸盐提取液（0.02mol/L ）：磷酸氢二钠溶液和磷酸二氢钠溶液混合调至pH 7.2 ， 4.9 硫酸铵溶液（30% ）：100 mL 水中溶入16.4 g 硫酸铵固体 4.10 流动相：乙腈：水：三氟乙酸=40:60:0.05 （体积比） 4.11 水系滤模：孔径0.22 μ m 4.12 菌菇凝集素标准物质（纯度≧99% ） 4.13 菌菇凝集素标准溶液：准确称取5 mg （精确至0.10 mg ）菌菇凝集素标准品，置于5 mL 容量瓶 中，用水溶解并定容至刻度线。该标准溶液中菌菇凝集素的质量浓度为1 mg/mL，-18℃冰箱避光保存， 有效期一周。 4.14 菌菇凝集素系列标准工作液：分别准确移取0.25 mL 、0.3 mL、0.45 mL 、0.5 mL、1.0 mL 凝集素 标准溶液于不同的5 mL 容量瓶中，用水稀释、定容刻度线，摇匀，得到菌菇凝集素系列标准工作溶液 （质量浓度分别为50 μg/mL、60 μg/mL、90 μg/mL 、100 μg/mL、200 μg/mL ）。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。 5.2 超声波振荡器 5.3 分析天平，感量0.01 g 和0.0001 g 。 5.4 离心机，5000 r/min 以上。 5.5 破壁机 5.6 超滤离心管：50 mL，10 kd 5.7 容量瓶：5 mL 5.8 烧杯：50 mL，500 mL 5.9 凝胶色谱柱，TSKgel G2000SWXL，7.8 mm I.D.×30 cm，5 μm ，或相当规格色谱柱 5.10