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SUMO化修饰对RIG-I分子功能的影响的开题报告 背景 对于紫外线、氧化应激、热休克等常见的压力因素，机体通过启动自身的免疫系统来应对。在哺乳动物中，抗病毒免疫应答主要经过两条途径：一、Toll样受体（TLR）共同作用的信号通路；二、在识别到病毒颗粒时发生内部细胞体觉（innate intracellular sensory）。 RIG-I（Retinoic acid-inducible gene I）是内部细胞体觉信号通路中最重要的受体之一，能够感知到病毒核酸增殖过程中的产物，进而招募适当的适体使病毒打回旗鼓。 研究表明，RIG-I通过SUMO化修饰来调节其信号通路。SUMO化蛋白是一种调节蛋白转录因子活性、蛋白质定位、蛋白质稳定等细胞过程的小分子，它在调节免疫系统、细胞周期、基因分化、细胞凋亡等方面发挥着重要作用。然而，关于RIG-I在 SUMO化修饰下的分子生物学调控机制仍然需要深入研究。 研究问题和研究目的 SUMO化修饰对RIG-I受体分子功能的影响是当前研究热点之一，可以通过以下问题来引导研究： 1. SUMO化修饰如何影响RIG-I与病毒RNA的结合？ 2. SUMO化修饰对RIG-I信号通路的激活过程有何影响？ 3. SUMO化修饰对RIG-I的抗病毒免疫反应有何影响？ 本研究目的是，通过实验验证 SUMO化修饰对RIG-I受体分子功能的影响，并深入探讨这种机制背后的分子生物学调控方式，为进一步研究和应用免疫调节剂提供理论依据。 研究方法和技术路线 本研究将采用以下方法和技术路线： 1. 构建RIG-I的SUMO化和未SUMO化突变体。通过克隆等技术，构建出RIG-I蛋白SUMO化和未SUMO化两种突变体。 2. 筛选实验室备用细胞系。将构建的两种突变体转化到不同的实验室细胞系中，筛选出适宜本实验的实验室备用细胞系。 3. 用 Western blot 验证SUMO化修饰是否成功。使用 Western blot 技术验证构建的SUMO化和未SUMO化突变体是否有效。首先用抗FLAG抗体检测RIG-I的表达，然后用抗SUMO抗体检测SUMO化的程度。 4. 测定SUMO化修饰对 RIG-I 受体分子的影响。细胞免疫印迹法和荧光显微镜技术，评估 SUMO化修饰对RIG-I与病毒RNA的结合、对RIG-I信号通路激活传递的影响。 预期结果 本研究预计将深入探究 SUMO化修饰对RIG-I受体分子功能的影响，特别在细胞钙离子调节、炎症介质释放等方面的调节机制，也可在理论上解释信号通路激活以及生理学过程中其他涉及细胞活动的过程。本研究可能会对开发免疫调节剂做出贡献，有望为治疗免疫性疾病以及病毒感染等提供理论和实践的帮助。