小龙虾下脚料中虾青素和甲壳素提取工艺研究.docxVIP

? ? 小龙虾下脚料中虾青素和甲壳素提取工艺研究 ? ? 张乐宏，盖永强*，王鹏，王耀宗，程致远，甄天元，朴美子，李岩* （1.青岛农业大学食品科学与工程学院，山东 青岛 266109；2.济宁海关，山东 济宁 272000；3.潍坊英轩实业有限公司，山东 潍坊 262499；4.青岛农业大学海洋科学与工程学院，山东 青岛 266109） 小龙虾，作为一种淡水虾，其肉质鲜美，且肉中蛋白质与必需氨基酸含量丰富，脂肪含量低，深受广大人民群众的欢迎[1]。由于其庞大的销量，每年会产生大量的虾壳（含12%～16%的钙、10%～15%的甲壳素和7%以上的壳聚糖）[2]、虾头等下脚料（含有丰富的虾青素[3]、蛋白质[4]、氨基酸[5]等）。这些下脚料如处理不当，会造成环境污染和资源浪费。目前，关于小龙虾下脚料精深加工方面的研究主要集中在提取虾青素和虾红素、提取甲壳素和壳聚糖、制作小龙虾调味料、提取蛋白质及类脂、提取虾油、提取抗氧化小肽类与生物钙类等方面[6]。然而，由于小龙虾下脚料中不同成分的提取工艺存在差异性，实际生产过程中，一般仅对某种成分进行提取，难以做到对多种成分连续、高效提取，制约了小龙虾产业可持续发展。 虾青素，是一种经济价值非常高的类胡萝卜素[7]。研究表明，虾青素素有“超级维生素E”[8]的美誉，其具有抗氧化[9]、抗炎[10]、抑制肿瘤[11]、养眼[12]、增进机体免疫力[13]等生理功能。目前，虾青素提取的方法分为两大类：天然提取、化学合成。化学合成工艺复杂，生成副产物，且化学合成的虾青素在生物活性、生物吸收以及着色性能等方面都比不上天然虾青素。提取天然虾青素的方法有以下几种：油溶法、有机溶剂提取法、碱提法、超临界CO2流体萃取法[14]。甲壳素，又称几丁质，是一种线性高分子多糖[15]。研究表明，甲壳素可调节机体pH值、提高免疫力、预防癌变[16]、控制血糖[17]等。常见的甲壳素提取方法主要有以下几种：化学法（工业常用，易对环境造成危害）、乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）法（成本过高）、酶解法（成本高、耗时长）[18]、微生物发酵法（耗时长）[19]、离子液体提取法（不可回收循环，存在安全风险）[20]等。 本研究通过有机溶剂（乙酸乙酯）浸提法提取虾青素，之后利用浸酸浸碱法提取甲壳素。连续浸提工艺可以最大程度利用下脚料资源，有利于工业化连续生产。本研究利用小龙虾下脚料中的虾壳，经单因素和响应面试验分别优化了虾青素、甲壳素最佳提取工艺，实现两种成分的高效、连续提取，为小龙虾副产物高值化利用提供数据支撑。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 小龙虾：市售；虾青素标准品：上海江莱生物科技有限公司；盐酸（HCl）、氢氧化钠（NaOH）、无水乙醇、草酸（分析纯）：莱阳市康德化工有限公司；乙酸乙酯、高锰酸钾（KMnO4）、二氯甲烷（分析纯）：天津市富宇精细化工有限公司。 1.2 仪器与设备 高速万能粉碎机（FW135）：北京市永光明医疗仪器有限公司；电热恒温水浴锅（HHW-21CU-600）：上海福玛实验设备有限公司；恒温振荡器（SHA-B）：武汉格莱莫检测设备有限公司；高速台式冷冻干燥机（TGL-16M）：浙江赛德仪器设备有限公司；冷冻干燥机（FD-A10N-50）：冠森生物科技有限公司；紫外可见分光光度计（WFZUV-2000）：美国贝克曼公司；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9023A）：上海廷翌仪器设备厂；酸碱指示计（PHS-3C）、电子分析天平（AR1140）：上海奥豪斯国际贸易有限公司；循环水真空泵（SHZ-D）：上海贝仑仪器设备有限公司。 1.3 虾青素提取工艺操作要点 虾壳预处理：将小龙虾壳肉分离，小龙虾壳用清水洗净、沥干、-80℃冷冻，然后置于冷冻干燥机中冻干处理24 h，干燥后的虾壳于粉碎机中24 000 r/min破碎1 min，获得208 g虾壳粉，干燥保存待用。 蛋白质的去除：将虾壳粉放入烧杯，用pH2.5的HCl溶液浸泡，放入60℃保温箱水解1 h，抽滤所得粉末进行冷冻干燥，保存待用。 虾青素浸提液制备：称取0.5 g虾壳粉于离心管，加入10 mL浸提液（乙酸乙酯、二氯甲烷、无水乙醇），于35℃浸提2 h，离心，取上清液得虾青素浸提液。 以虾青素提取量为指标，选择浸提试剂（乙酸乙酯、二氯甲烷、无水乙醇）、料液比[1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60（g/mL）]、浸提温度（15、25、35、45、55 ℃）、浸提时间（30、60、90、120、150、180 min）和浸提次数（1、2、3次）5个因素进行单因素试验，分析各因素对小龙虾下脚料中虾青素提取量的影响。 1.4 虾青素提取量的测定 准确称取0.5 g虾壳