NY_T 1156.17-2009农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第17部分：抑制玉米丝黑穗病菌活性试验 浑浊度-酶联板法.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1156.172009杀菌剂农药室内生物测定试验准则第17部分：抑制玉米丝黑穗病菌活性试验浑浊度一酶联板法Guideline for laboratory bioassay of pesticidesPart 17: Turbidity-multiScreen filter plates test for fungicidesinhibiting Sporisorium holci-sorghi2009-12-22 发布2010-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1156.17—2009前言NY/T1156《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》分为如下部分：第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平血法第3部分：抑制黄瓜霜霉菌病菌试验平皿叶片法第4部分：防治小麦白粉病试验盆栽法第5部分：抑制水稻纹枯病菌试验蚕豆叶片法第6部分：混配的联合作用测定第7部分：防治黄瓜霜霉病试验盆栽法第8部分：防治水稻稻瘟病试验盆栽法第9部分：抑制灰霉病菌试验叶片法第10部分：防治灰霉病试验盆栽法第11部分：防治瓜类白粉病试验盆栽法第12部分：防治晚疫病试验盆栽法第13部分：抑制晚疫病菌试验叶片法第14部分：防治瓜类炭疽病试验盆栽法盆栽法第15部分：防治麦类叶锈病试验第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法第17部分：抑制玉米丝黑穗病菌试验浑浊度-酶联板法本部分是《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》的第17部分。本部分由农业部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所。本部分主要起草人：朱春雨、刘西莉、吴新平、杨峻、嵇莉莉、张薇、聂东兴。I NY/T 1156.17—2009农药室内生物测定试验准则杀菌剂第17部分：抑制玉米丝黑穗病菌活性试验浑浊度-酶联板法1范围本部分规定了浑浊度-酶联板法测定杀菌剂对抑制玉米丝黑穗病菌活性试验的仪器设备、试剂与材料、试验步骤、试验方法、数据统计及分析。本部分适用于测定杀菌剂对玉米丝黑穗病菌孢子萌发和先菌丝生长抑制作用的农药登记室内试验。2仪器设备2.1电子天平（感量0.1mg）；2.2恒温摇床；2.3离心机；2.4酶标板；2.5酶标仪；2.6移液管或移液器等。3试剂与材料方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯；水为无菌蒸馏水。3.1生物试材供试靶标为当年采收的野生敏感型玉米丝黑穗病菌Sporisoriumholci-sorghi冬孢子粉，记录菌种来源。3.2试材准备改良理查培养液的配制：分别称取硝酸钾KNO：10.00g、磷酸二氢钾KHzPO45.00g、硫酸镁MgSO42.50g、氯化铁FeCl30.02g和葡萄糖30.00g至烧杯中，用水溶解并定容至1L。酶标板、移液管或移液器和改良理查培养液灭菌后备用。3.3试验药剂采用原药（母药），并注明通用名、含量和生产厂家。3.4对照药剂采用已登记且生产上常用的原药。对照药剂的化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近。4试验步骤4.1药剂配置水溶性药剂直接用水溶解稀释，其他药剂选用合适的溶剂（如甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜等)溶解。用含有0.05%的吐温-80水溶液稀释，根据药剂活性配制5个～7个系列质量浓度(2倍终浓度），有机溶剂的最终含量不超过0.3%。其中以等量的有机溶剂和吐温-80水溶液作为本底液。4.2带菌培养液准备1 NY/T 1156.17-2009称取10mg病菌冬孢子粉，用10mL的0.03%的吐温-20水溶液浸泡展着4h，于4000r/min下离心10min，弃上清液。于孢子沉淀物中加人0.25%高锰酸钾KMnO4水溶液10mL，震荡摇匀，静置25min。离心，弃上清液。于沉淀物中加入0.05mol/L盐酸溶液10mL，震荡摇匀，静置6h。离心，弃上清液。最后将孢子沉淀物转移到200mL改良理查培养液中，混匀，制备成带菌培养液备用。4.3药剂处理在无菌操作条件下，用移液器依次吸取75μL的带菌培养液分别加入已灭菌的酶联板各小孔中。然后用移液器从低浓度至高浓度，依次吸取75uL不同浓度梯度的药液，使药液和带菌培养液等量混合均匀。以75uL无菌培养液加75μL本底液处理为参比对照，以75uL带菌培养液加75μuL本底液处理为空白对照。每处理不少于4次重复。5培养将酶标板置于摇床上，在28℃、150r/min条件下摇培84h。6 调查用酶标仪测定650nm或655nm波长下不同处理的吸光度。各处理的吸光值取4次重复的平均值（结果保留3位有效数字）。7数据统计及分析7.1计算方法根据调查数据，按公式(1)计算各处理对玉米丝黑穗病菌孢子萌发和先菌丝生长的抑制率，单位为百分数（%），计算结果保留小数点后两位。Ao-A ×10