小球藻对3种抗生素敏感性的研究.docxVIP

小球藻对3种抗生素敏感性的研究 微藻是一种广泛分布于陆地和海洋中的自养植物。它具有丰富的营养成分和高的光合利用。但在微藻的培养过程中经常发生菌污染现象,限制了藻的正常生长和繁殖。因此,人们在研究微藻营养价值、生理生化、毒理学、药理学等过程中,往往需要在藻液中加入适量抗生素。然而,不同的抗生素对微藻生长和繁殖的影响不同。刘卫东等用抗生素对3种海洋微藻(牟氏角毛藻、球等鞭金藻8701、盐藻)进行试验,发现不同微藻生长所需的抗生素浓度不同,抗生素对微藻生长的影响不完全取决于抑菌作用,青霉素促进球等鞭金藻8701生长主要是产生促生长因子,庆大霉素抑制生长可能是产生抑制因子。岳伟萍选用氨苄青霉素对4种海洋微藻进行实验,发现4种海洋微藻普遍对氨苄青霉素有抗性。赵培等采用青霉素、硫酸庆大霉素、头孢他啶3种常用抗生素处理海洋微藻(小球藻、球等鞭金藻、紫球藻),结果表明抗生素可抑制水生细菌的繁殖,在除菌、抑菌方面表现出了不同的作用。 不同藻种对各抗生素的敏感性不同,不同抗生素对菌的抑制能力也不相同。该研究以小球藻(Chlorellasp.)为研究对象,探讨青霉素、氨苄青霉素、头孢他啶等3种抗生素对其生长和抑菌能力的影响,为藻类纯化技术研究提供相关依据。 1 材料和方法 1.1 试验藻类 小球藻购自中科院水生生物研究所藻种库。 1.2 仪器、仪器和检测方法 主要仪器:UV-1200型可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司);血球板计数器(上海求精生化仪器有限公司);XS-200显微镜(上海光学仪器厂)。主要试剂:青霉素钠(80万IU)购自石家庄中诺药业有限公司;氨苄青霉素(100万IU)购自北京拜尔迪生物技术公司;头孢他啶(80万IU)购自上海先锋药业公司。 1.3 方法 1.3.1 藻细胞密度测定 藻细胞在一定生长时期内的生物量与其在最大吸收波长下的吸光度值成正比,故用最大吸收波长下的吸光度代替血球板计数法测定培养液中的藻细胞密度。 1.3.2 微量元素溶液 选择生长良好的藻种扩大培养,5 d为一周期进行继代培养,活化3次,每天摇瓶3~5次,观察微藻生长情况,待进入对数生长期时,将其接种至一定的初始密度,用于抗生素敏感性试验。预培养微藻的营养盐配方(g/L):NaNO30.25、K2HPO40.075、MgSO4·7H2O 0.075、CaCl2·2H2O 0.025、KH2PO40.175、NaCl 0.025、FeCl3·6H2O 0.000 5、EDTA-Fe 0.002 06和微量元素溶液(mg/L):H3BO32.86、MnCl2·4H2O 1.86、ZnSO4·7H2O 0.22、Na2MoO4·2H2O 0.39、CuSO4·5H2O 0.08、Co(NO3)2·4H2O 0.05。温度控制在(24±1)℃,光暗比为12 h∶12 h,光照强度500~1 500 lx。在藻种传代及培养过程中,均严格遵循无菌操作。 1.3.3 加抗生素的筛选 将青霉素,氨苄青霉素,头孢他啶分别按0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L浓度加入到100 ml处于对数生长期的藻液中。以未加抗生素的藻液为对照,每组设3个平行。培养观察,每天摇瓶3~5次,每3 d测藻液686 nm处光吸收值OD686。 1.3.4 细胞密度试验 用分光光度计测定686 nm处藻液的吸光值,以反映细胞密度的大小。每个试验重复3次,结果取3次试验数据的平均值。 生长率(%)=(某一天藻细胞密度-初始藻细胞平均密度)/初始藻细胞平均密度 2 结果与分析 2.1 激素对小球藻繁殖的影响 由图1可知,在液体培养中,青霉素既能抑菌又能抑藻,10.0 mg/L的青霉素对小球藻的生长有明显抑制作用,但不能完全抑制,即培养1周后藻液出现絮状,说明 10.0 mg/L的青霉素超过了藻细胞的耐受能力,藻细胞的生长繁殖受到了明显的抑制。与对照相比,其他浓度的青霉素对小球藻生长均有促进作用,所对应的生长率值均高于对照组的生长率值,这主要因为加入低浓度青霉素后能够抑制菌种的繁殖而不影响小球藻的生长。青霉素在0.5~5.0 mg/L 时可提高小球藻细胞的含量,表明低浓度(5.0 mg/L)的青霉素对小球藻的长期培养是有利的。聂昌金等研究表明青霉素对试验藻生长有抑制作用,但可能没有杀灭作用。也有研究表明,低于100 mg/L的青霉素对小球藻的生长有促进作用;低于25 mg/L的青霉素对金藻的生长有刺激效应,藻细胞密度明显增加。这与该试验结论相符,表明不同青霉素浓度对藻生长的影响存在差异,造成这些差异的原因可能与藻种有关,但总体来说,低浓度青霉素对小球藻生长有利。 2.2 氨苄激素对小球藻生长的影响 氨苄青霉素是一种广谱半合成青霉素类药物,毒性极低。岳伟萍研究表明氨苄青霉素在5 mg/L到