微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告.pdfVIP

- ! 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告 一、实验目的 1.学习微量凯氏定氮法的原理 2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术（未知样品的消化、蒸馏、滴精品文档放心下载 定及其含氮量的计算等） 二、实验原理 凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）精品文档放心下 载 的含氮量。 当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被氧化成二氧精品文档放心下载 化碳和水，而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称感谢阅读 为 “消化”。 此过程进行的相对较为缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提感谢阅读 高溶液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。氧化感谢阅读 剂过氧化氢也能加速反应。 消化过程： 2NH  H SO  (NH ) SO 3 2 4 4 2 4 含氮有机物  H SO  CO  SO  H O  NH 2 4 2 2 2 3 蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热感谢阅读 - ! 蒸馏，即可释放出氨气。 反应方程式如下： (NH ) SO  2NaOH  Na SO  2NH OH 4 2 4 2 4 4 吸收与滴定：蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行吸收，待吸收谢谢阅读 完全后，再用盐酸标准溶液滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为精品文档放心下载 止（即滴定至蓝紫色)，最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测感谢阅读 物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。 NH  H BO  NH H BO 3 3 3 4 2 3 NH H BO  HCL  NH CL  H BO 感谢阅读 4 2 3 4 3 3 三、实验试剂、材料和器材 实验材料：食用面粉。 实验试剂：浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、精品文档放心下载 指示剂、0.01M HCL。 实验器材：凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、锥形瓶、100ml感谢阅读 容量瓶、酸式滴定管。 四、操作步骤 1.消化 （1）准确称取 1 克食用面粉，用称量纸卷好小心送入至 50 毫升谢谢阅读 的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上； - ! （2）向另一烧瓶加入 1ml 水作空白对照； 在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂）少许， 浓硫酸 10ml，小瓷片两粒，摇匀；谢谢阅读 （3）将烧瓶约 60 度角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗， 在通风厨内的电炉上消化；精品文档放心下载 （4）在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈；谢谢阅读 （5）待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出 SO2 白烟后，适 当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止；精品文档放心下载 （6）消化完毕，待烧瓶内容物冷却后，加蒸馏水 10ml （注意 慢加，边加边摇）；谢谢阅读 （7）冷却后将瓶中内容物转入 100ml 的容量瓶中，并用蒸馏水 洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻