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elisa法检测的影响因素及对策 酶联免疫吸附法是一种特殊的试剂分析技术。在免疫酶技术的基础上开发了一种新的免疫测定技术。这些试剂很容易保存，并且对结果的评估也很客观。这是目前实验室检测抗感染药物最经济、最常见的实验诊断方法。其原理是将抗原 (抗体) 结合到固相载体表面, 再将待测抗体 (抗原) 、酶标抗原 (抗体) 与固相抗原 (抗体) 结合形成免疫复合物, 经洗涤使免疫复合物与待测抗体 (抗原) 呈比例, 加入酶反应底物使其与固相上的酶反应变色, 根据颜色做定性或定量分析, 得出检测结果。ELISA法步骤包括标本的采集、保存、加样、温育、洗板、显色、比色以及结果判断, 临床采集待检样本过程中常出现溶血、黄疸、脂浊, 类风湿因子、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物及血液抗凝剂等亦对结果产生一定影响。虽然操作简单, 但还是需要注意一些因素的影响, 试剂的选择、正确的操作、优良的仪器都与检测结果密切相关。本文根据样本的影响因素及操作流程中可能出现的相关问题展开笔述, 对ELISA法检测的影响因素及相应对策作一综述, 希望提高ELISA法检测的准确性。 1 标本采集过程中可能导致检测结果不准确 临床采取空腹抽取静脉血清作为ELISA检测标本, 标本采集过程中很多因素可能导致检测结果不准确, 如溶血、脂浊、类风湿因子、甲胎蛋白、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物、血液抗凝剂及细菌污染等。 1.1 控制溶剂用量的确定 溶血时红细胞破裂释放出具有过氧化物酶活性的物质干扰试验结果出现假阳性, 孙辉等通过实验报道样品溶血血红蛋白浓度不大于4.95g/L, 对双抗原夹心法、间接法、竞争法、捕获法检测结果均无影响。徐传国认为溶血易导致弱阳性标本漏检, 黎学东等认为虽然溶血会对HB-s Ag检测造成假阳性影响, 但是小于8g/L时可以检测;王红等使用不同的干扰物浓度及分析方法得出结论, 随着溶血程度的增高HBs Ag检测OD值有轻微增高趋势;但是溶血检测抗-HIV无影响。 临床工作中无法采集到无干扰物血清或因操作因素导致标本出现溶血时, 评估标本干扰物含量及标本处理情况, 在有效范围内进行ELISA检测, 对于溶血标本可先测定血浆Hb含量, 不大于5g/L时可用于HBs Ag的检测, 超过此范围的阳性标本最好做复检, 避免假阳性结果发生。目前也有通过增设试验孔的方法来处理轻度甚至重度溶血标本的检测, 使溶血造成的假阳性结果得到纠正, 且有非常显著性统计学意义。 1.2 颗粒颗粒对乳糜血液生长的影响 孙辉等通过实验报道乳糜样品含福尔马肼浊度小于1460FTU的乳糜时, 对双抗原夹心法、间接法、竞争法、捕获法的检测结果均无影响。汪建国等认为脂质颗粒会黏附在反应孔内壁, 使吸光度A值增高出现假阳性;徐学新等认为不同程度的乳糜血液随着放置时间的延长OD值下降, 导致不同程度的漏检。虽然可采取高速离心的方法可将乳糜微粒去除, 此过程可能对检测结果带来影响, 然而盲目采取高速离心等方法试图去除干扰物并不可取。 1.3 其他检测方法的影响 结合胆红素浓度不大于344μmol/L对双抗原夹心法、间接法、竞争法、捕获法的检测结果均无影响, 超过浓度的样本应重新采集, 对于黄疸病人为保证检测结果的可靠性可选择其他检测方法。 1.4 elisa检测、固相包被和hbsag的共混合体的检测研究 在类风湿患者及健康者血清中常含有类风湿因子 (RF) , RF为一种抗人或动物变性免疫球蛋白Ig G的自身抗体, 与Ig G分子Fc片段抗原决定簇结合, 常见的有Ig M、Ig A、Ig G、Ig E型, 均能与变性Ig G抗体产生非特异性结合, 在ELISA检测抗原的试剂盒中, RF可与固相包被的表面抗体的Fc片段及酶标记物中免疫球蛋白结合。研究表明高浓度的类风湿因子可引起ELISA检测抗原检测出现假阳性结果, 类风湿因子可与固相上包被的特异性抗体Ig G及随后加入的酶标特异性抗体Ig G结合出现假阳性结果。穆海霞等研究报道高浓度RF (500IU/ml) 对ELISA检测HBs Ag产生假阳性结果较明显, 且与RF浓度无显著相关性。 在临床工作中, 若出现乙肝两对半少见模式, 如仅HBs Ag阳性, 应结合患者病史并采用其他方法如微粒子酶免疫法进行复检, 慎重报告。 1.5 固相抗体及酶标二抗 人类血清中含有天然异嗜性抗体, 而异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗产生假阳性结果。来自哺乳动物的固相抗体及酶标二抗可激活人体补体系统, 在反应过程中抗体分子结构发生变化, 暴露补体的结合位点, 产生假阳性结果, 也可能固相抗体因为活化补体的结合导致抗原抗体的表位结合能力下降, 出现假阴性结果。研究报道高浓度的乙型肝炎表面抗体会引起HBs Ag检测出现假阴性结果, 临床需注意避免携带污