种质保存（植物组织培养课件）.pptx

植物种质资源的保存;1.掌握种质资源长期保存与中短期保存的方法。 2.掌握超低温保存的基本流程。　 3.能够根据离体材料的特点，离体保存种质材料。; 种质：亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。 植物种质资源： 为携带各种不同遗传物质的植物总称，又称遗传资源或品种资源，包括栽培，野生及人工创造的各种植物的品种或品系。 种质资源保存： 指在天然或人工创造的适宜环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力与遗传性的技术。 ;原地保存;1、可使一些无性繁殖作物种质资源低温长期保存，避免资源的丢失。 2、节省土地和劳力，方法简单，花费少并能在保存中脱毒。 3、一旦利用可快速繁殖；也利于种质交换。;;二、限制生长离体试管苗保存（以马铃薯为例） （1）获得马铃薯试管苗。 （2）将马铃薯试管苗分割，接种MS培养基，培养基中 添加脱落酸和甘露醇，如欲增加保存时间，可以增 加培养基用量。 （3）以塑料薄膜封闭试管口。;珍宝岛国家级自然保护区;华南植物园;西双版纳植物园;;;;玉米新建悬浮培养体系超低温保存技术 （一）新建玉米悬浮培养体系 1.种子消毒 2.剥离未成熟胚 3.愈伤组织诱导培养 4.悬浮培养;（二）3～4d后用不含脯氨酸的新鲜培养基将上述预处理过的悬浮细胞洗净、重新悬浮培养于新鲜培养基中。 （三）将含有20%脯氨酸的冷培养基分成4份并在1h内逐渐加入到等量的冷细胞悬浮液中。 （四）将混合液在冰上保存1h后，转移到灭过菌的聚丙烯安剖瓶中，盖好螺帽（每两个安剖瓶中用移液枪接入1mL混合液）。;（五）用可控降温仪以1℃/min的速度将按剖瓶冷却到-30℃，并停留30～40min后投入到液氮冰箱中进行贮存。 （六）解冻时，从液氮冰箱中取出安剖瓶，直接放到40℃水浴锅中，停留1～2min. （七）将混合液涂在琼脂平板培养基上进行重新培养。 （八）细胞生命活力检查 ;超低温库;马铃薯限制生长离体试管苗保存技术;种质资源离体保存;（一）低温保存 一种缓慢生长保存方法，是通过控制培养温度来限制培养物各种生长因子的作用，使培养物生长减少到最低限度。 ;低温保存的基本特征是保存材料的定期继代培养，不断繁殖更新； 基本措施是控制保存材料所处的温度和光照。 延缓保存材料生长速度的另一项措施是改变培养基的成分。;（二）超低温保存 一般以液N2为冷源;1、保存原理 低温冰冻过程中，如果生物细胞内水分结冰，细胞结构就遭到不可逆的破坏，导致细胞和组织死亡。植物材料在超低温条件下，冰冻过程中避免了细胞内水分结冰，并且在解冻过程中防止细胞内水分次生结冰而达到植物材料保存目的。 ; 植物细胞含水量大，冰冻保存难度大，投放液N2中易引起组织和细胞死亡，故须借助于冷冻防护剂，防止细胞冰冻或解冻时引起过度脱水而遭到破坏，保护细胞。;超低温冰箱;2、基本程序 超低温保存的基本程序包括预处理、冷冻处理、冷冻贮存、解冻和再培养。;（2）冷冻处理;a、快速冷冻法 指将植物材料从0℃或者其他预处理温度直接投入液氮中保存的方法，降温速度为1000℃/min。 要求细胞体积小、细胞质浓厚、含水量低、液泡化程度低的材料。;b、慢速冷冻法 将处于0℃或其他预处理温度的材料以1-2℃/min的降温速度从起始温度降到-100℃，稳定1h后，投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至-196℃的方法。 适宜保存的材料有成熟的、含有大液泡和含水量高的细胞，对于保存在悬浮培养中的细胞特别有效。;c、预冷冻法 指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂时间的低温锻炼的方法。可分为两步冷冻法和逐级冷冻法。 可使保存材料细胞内充分脱水，避免因细胞内结冰而导致不可逆伤害的出现。;（3）冷冻贮存 适宜温度下贮存冷冻材料也很重要。长期内贮存在液氮内的材料，需合适的液氮容器。冷冻贮存的茎尖随保存时间的延长，其生活力可能下降。;解冻方法;a、快速解冻法 是指将液氮中保存的材料直接投入到37-40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500-750℃/min，大多数植物材料可采用此种方法。;（5）再培养 指将已解冻的材料重新置于培养基上使其恢复生长的过程。再培养是检验冷冻保存效果或确定保存方法是否合适的最根本方法。;组织材料;3、影响因素 预处理 冷冻 解冻方法 植物材料的性质 冷冻保护剂的使用;所使用的冷冻保护剂应具有以下特性： 分子质量较小 易于与溶剂混合