【安徽】13-14学年中职农业生物技术（主编曹春英、丁雪珍第二版高教版）...pdfVIP

第四节 农业微生物培养技术 一、授课章节 第四节 农业微生物培养技术。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握固体培养技术。 ．掌握液体培养技术。2 四、教学重点、难点分析 重点： 1．固体培养技术。 ．液体培养技术。2 难点： 1．摇瓶培养技术。 2．发酵罐液体深层培养技术。 五、教具 电化教学设备。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 上节回顾：上节主要讲述了微生物保藏技术和菌种复壮技术。 本节主要讲述微生物培养技术，主要包括固体培养技术、液体培养技术。 II.新课 一、微生物固体培养技术 （一）平板培养技术 1．技术路线 斜面菌种  活化  平板接种  培养  收获 2．操作步骤 1 （1）菌种活化 （2）平板接种 固体培养基灭菌后倒入无菌培养皿中凝固之后制成平板。细菌和单细胞微生物的平板接 种常使用划线和涂布的方法，而丝状真菌和产孢微生物常用点种接种方法。 （3）培养 细菌培养温度一般在30℃下培养，真菌一般在28℃下培养，人体微生物培养温度一般 在37℃。细菌一般培养24h，真菌需要2～3d。培养仪器一般为培养箱、霉菌培养箱、光照 培养箱以及厌氧的二氧化碳培养箱等等。 （4）收获 待培养的微生物培养一定时间，菌落或菌苔丰厚，应该及时收集起来，4℃保藏，以免 出现老化现象。 3．注意事项 （1）接种工具一定要灭菌彻底，防止污染，培养过程中也要注意无菌操作。 （2）细菌收获一般在生长旺盛时期，真菌一般在产生大量成熟的孢子之后再收集。 （3）接种后的接种工具应及时消毒后存放，接种的工作台和无菌室也应进行消毒，保 持洁净。放置培养箱的培养室也应定期消毒，防止污染。 （二）固体基料培养技术 1．技术路线 斜面菌种  活化  基料接种  培养  收获 2．操作步骤 （1）菌种活化 （2）基料接种 基料指为培养微生物而配制的特定固体基质。例如，麸皮、锯末、马铃薯块、玉米粒等。 基料接种时先将基料加热 （100℃，30min）灭菌消毒，再接入10%基料量的菌种。 （3）培养及收获 固体基料发酵的温度控制以基料表层温度为准，细菌一般为30℃，真菌为28℃。工业 生产中往往为了避免杂菌污染，常选育耐高温菌种，培养温度常在 40℃左右。培养一定时 间后，及时收获。 3．注意事项 （1）固体培养多是粗放性培养方式，但也应注意环境卫生，定期对培养室进行消毒处 2 理。 （2）基料接种培养得到的培养物，可作为生产用种子，进一步扩接生产。 二、微生物液体培养技术 （一）摇瓶培养技术 1．技术路线 斜面菌种活化摇瓶接种振荡培养收获 2. 操作步骤 （1）菌种活化：菌种的活化与斜面菌种保藏法一致。 （2）摇瓶接种:一般500 mL三角瓶，装液体培养基100 mL，接种量一般为10%。 （3）振荡培养及收获 细菌一般在30℃，380～480 r/min振荡，培养24～48 h；真 菌为28℃，200～300 r/min振荡，培养48～72 h，就可以收获了。 3. 注意事项 6 8 （1）细菌和单细胞微生物的菌悬液浓度要求必须大于10 以上，最好10 。 6 8 （2）产孢微生物的孢子液浓度要求必须大于10