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高压灭菌器灭菌效果的验证 实验室常用的是高压蒸汽灭菌器。GB4789. 1-2016中要 求：实验设备应定期进行检查和/或检定（加贴标志）、维护 和保养，以确保工作性能和操作安全。 高压蒸汽灭菌器灭菌效果验证一般有化学指示剂法、留点温 度计法、自制测温管法和生物指示剂法，每种方法的原理都是相 似的，主要是通过验证灭菌时灭菌器里的温度能否达到要求。我 们可以根据自己实验室的具体情况选择其中一种或多种方法进行 验证。 一、化学指示剂法 原理：化学指示剂在一定温度与作用时间下，会受热变色或 变形，根据这一特点来判断是否达到需要的灭菌参数。 一般实验室常用的是3M压力灭菌指示胶带，这种指示胶带 是利用灭菌前后胶带颜色变化来判断灭菌效果。它是由热敏化学 物质与显色剂及漆辅料制成油墨，并将油墨以条纹状印制在特制 的一面胶纸带制成。指示胶带可以直接粘贴于包裹外，长度不低 于5cm,并轻压胶带以增加粘性和封包效果；在12UC持续 20min或13CTC持续4min后，胶带上印有的斜行的白色指示线 条会完全变黑，成为黑色线条；如变色不均匀或不彻底，可认为 该包裹不符合灭菌条件。 二、留点温度计法 原理：留点温度计法是利用水银温度计不回流的特性，其原 理跟传统体温计相似，可以指示灭菌器在灭菌过程中达到的最高 温度。 验证时把水银温度计放在盛水的大三角瓶里，灭菌时把三角 瓶放在灭菌器的上部和下部，灭菌结束后看水银温度计的温度和 要求温度是否一致。此法只能验证温度，不能指示灭菌时间是否 达到要求，因此是灭菌器验证的最低标准。 三、自制测温管法 原理：利用一些化学药品受热熔化后再冷却，晶体的外形不 同的特性，把化学药品密封在小玻璃管内，灭菌时放在灭菌器 里，灭菌完后观察晶体的形状，就可以判断温度是否达标。 常用的试剂是苯甲酸，苯甲酸的熔点为121-123C,跟我们 要求的灭菌器的灭菌温度基本吻合，因此灭菌时把固体苯甲酸密 封在小玻璃管内放进灭菌器，灭菌结束就可以观察苯甲酸的状态 来验证灭菌器是否达到了要求温度。这种方法的局限跟留点温度 计法相同，也只能指示灭菌时的温度，对灭菌时间是否达到要求 无法判断。 四、生物指示剂法 原理：利用非致病性的嗜热脂肪杆菌的芽匏作为指示菌，来 测定热力灭菌的效果。嗜热脂肪杆菌的芽胞对热的抗性较强，其 耐热能力与病原微生物肉毒梭菌芽抱相似，以此为指示菌，验证 灭菌器能否达到灭菌要求。 生物指示剂分为三种：芽抱悬液、芽胞菌片、菌片和培养基 混合指示管。一般放在灭菌容器的5个点：下层的前、中、后和 上层、中层的中央点。灭菌后取指示剂接种到澳甲酚紫-葡萄糖 蛋白陈水中，55-6(rc培养2-7天，若培养基澄清、颜色没有变 化即说明芽袍被杀死，灭菌器灭菌效果良好；如果培养基黄色浑 浊，说明芽袍未被杀灭，灭菌器灭菌效果不合格。芽抱悬液和芽 抱菌片的验证方法均是如此。 目前实验室还常用商品化的生物指示管，其原理与芽泡悬液 和芽胞菌片相同，指示管中有嗜热脂肪芽抱杆菌芽泡和培养液玻 璃小管，将指示管放在灭菌容器内的各个点上，高压灭菌后，将 管中盛培养液的玻璃管挤碎，培养液从内部的小管中被放出，放 入56t培养箱中培养，同时做阳性对照。若是灭菌器灭菌效果 不合格，指示管内的芽泡复活后生长会改变肉汤的颜色是肉汤变 为黄色；若是灭菌器灭菌效果良好则管内芽胞被灭活不再生长， 肉汤仍旧是原来的紫色。 对于灭菌器的效果验证，目前并没有相关标准严格的要求验 证的频次，但是实验室应当自行制定验证频次规定，并严格按照 要求进行。从操作性和验证结论两个方面出发，小编推荐使用指 示胶带和生物指示管，因为这两种方法操作简单，可以对灭菌效 果进行全面的验证！