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毒种种子批 包括原始种子批、主种子批和工作种子批的已验明其来源、历史和生物学特性并经临床研究证明其安全性和免疫原性的病毒株悬液，该悬液应为单一批，以确保其组成均一，并经充分鉴定。 工作种子批：按国务院药品监督管理部门批准的方法，从主种子批传代而得到的活病毒均一悬液，等量分装贮存用于生产疫苗。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第31页。 三级库管理的必要性 避免混淆 保证种子细胞和毒种的稳定性 保证生产均一性，减小批间差 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第32页。 Vero细胞培养方式 静止培养（克氏瓶） 转瓶培养 悬浮培养（载体） 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第33页。 Vero细胞转瓶传代 消化液：胰蛋白酶和（或）EDTA 传代比例：1：3～1：6 消化时间：细胞状况、消化液浓度、消化液pH值、消化温度 培养液：含8～10％新生牛血清的MEM，pH7.2 培养液量：～1500ml/15L瓶 培养温度：37℃ 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第34页。 狂犬病毒 子弹状 长180nm、直径75nm 最大特点之一就是嗜神经组织性 G蛋白是其主要表面抗原 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第35页。 病毒接种及收获 维持液：含0.1％人血白蛋白的MEM，pH7.6 培养温度：33～35℃ 病毒收获液检测指标：无菌检查、支原体检查、病毒滴度 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第36页。 定温室转瓶培养 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第37页。 中间品冷库 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第38页。 澄清及超滤浓缩 澄清采用不同孔径的微孔滤膜 澄清的目的是降低生物负荷，去除细胞碎片等影响超滤过程的杂质，部分去除Vero细胞蛋白及DNA。 超滤采用100K～500K滤膜 超滤的目的是浓缩狂犬病毒，降低收获液体积，去除小分子无效蛋白，减轻后期处理体积及蛋白压力。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第39页。 超滤原理 超滤是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第40页。 超滤原理 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第41页。 凝胶过滤层析原理 凝胶过滤层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶作为固定相，对混合物中各组分按分子大小进行分离的层析技术。 不同规格的凝胶其网孔直径范围不同，只允许分子量在一定范围的蛋白质分子进入，大的蛋白质分子被排阻在外，故形象地称为分子筛。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第42页。 凝胶过滤层析原理 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第43页。 柱层析纯化 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第44页。 谢 谢 ！！ 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第45页。 疫苗基础知识与疫苗研制 宁波荣安生物药业有限公司 乐威 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第1页。 生物制品概念 是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第2页。 人用生物制品 细菌类疫苗（包括类毒素） 病毒类疫苗 抗毒素及抗血清 血液制品 细胞因子 生长因子 酶 体内及体外诊断用品 其它生物活性制剂，如变态反应原、抗原抗体复合物、免疫调节剂、微生态制剂等。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第3页。 疫苗基础知识 疫苗（Vaccine）一词与天花疫苗（牛痘苗）有关，拉丁文 “vacc”是“牛”的意思。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第4页。 疫苗基础知识 与疫苗有关的三位伟大的科学家： 琴纳、巴斯德、科赫。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第5页。 琴纳的贡献 发明了牛痘疫苗预防天花 18世纪50％的儿童活不到10岁，其中40％死于天花。 每一块大陆都曾有数百万人死于天花。 1979年10月26日世界卫生组织宣布：天花已从地球上被彻底消灭。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第6页。 巴斯德的贡献 发明了减毒疫苗 发明了狂犬疫苗 巴斯德让当时被疯狗咬伤的人的发病率由20％下降到1％。 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第7页。 科赫的贡献 发现炭疽杆菌 确定传染病是由微生物引起的 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第8页。 疫苗的作用 预防疾病流行 疫苗基础知识与疫苗研制全文共45页，当前为第9页。 如果没有疫苗，这世界将会怎样…… 人口：可能不到10亿； 平均寿命：可能只有40～