不同助溶剂溶解阿苯达唑和阿苯达唑亚对细粒棘球绦虫幼虫作用的影响.docxVIP

不同助溶剂溶解阿苯达唑和阿苯达唑亚对细粒棘球绦虫幼虫作用的影响 currentgysh是一个广泛的疾病。这是由人类和一些动物寄生虫引起的严重人牛共患的疾病。它的流行在全世界几乎没有受到影响，已成为世界范围内的公共卫生问题。中国是受影响最大的国家之一。我国新疆地区囊型包虫病年发病率已达到42/10万。对包虫病的治疗,手术仍然是主要手段,但因手术并发症以及术后复发等问题,使包虫病的药物治疗逐渐受到重视。包虫病的药物治疗以苯并咪唑类药物中的阿苯达唑(ABZ)为首选,ABZ是一种脂溶性苯并咪唑类(BZD)广谱驱虫药物,广泛用于线虫、绦虫和吸虫等蠕虫病的治疗,但也同甲苯达唑一样存在肠道吸收差,肝脏浓度低等缺陷。因此,可通过增加抗包虫药物的溶解度和血药浓度,提高抗包虫药物的治疗效果。包根书等报道,同时使用两种助溶剂溶解药物体外干预细粒棘球绦虫原头蚴达到了很好的效果。 为了增强ABZ体外抗包虫作用,本研究对常用助溶剂DMSO和吐温80的使用浓度进行优化,通过高效液相色谱法检测不同助溶剂以及单用、联用助溶剂助溶的ABZ溶解度,观察不同助溶剂溶解的ABZ和阿苯达唑亚砜(ABZSX)体外抗细粒棘球绦虫原头蚴及囊泡效果,阐明以联用助溶剂助溶对ABZ和ABZSX体外抗细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡作用的影响,为溶解性较好的ABZ和ABZSX药物剂型研制提供依据。 材料和方法 1 材料表面 1.1 肝包囊的活性 细粒棘球绦虫原头蚴取自新疆华凌屠宰场屠宰绵羊的肝包囊,原头节活性在90%以上。原头蚴体外培养2～3个月后形成,直径为1～3 mm的囊泡。 1.2 细胞培养基和仪器 DMSO,日本Biosharp公司生产;吐温80(药用级),湖南尔康制药有限公司生产,批号胎牛血清,阿苯达唑,阿苯达唑亚砜,青、链霉素,RDMI 1640细胞培养基,美国GIBCO invitrogen公司生产;伊红,美国Amresco公司生产(批号:65BD32)。IKA-MS3 digital涡旋震荡仪,德国IKA公司生产;KQ-200VDB型双频数控超声清洗器,昆山市超声仪器有限公司生产;BP211D型电子天平,德国Sartorius公司生产;二氧化碳恒温细胞培养箱,美国Thermo公司生产;DM 1400 B型倒置荧光显微镜,德国Leica公司生产;美国高效液相色谱仪,美国Waters公司生产。 2 方法 2.1 dmso混合液培养 精密称取3份ABZ,分别置于10 ml容量瓶内,分别加入浓度为0.1%吐温80溶液、1% DMSO溶液及0.1% 吐温80和1%的DMSO混合溶液,置恒温培养振荡器中振摇24 h,取出,于室温下静置。取上清液于离心管中,以9 900 r/min(离心半径9.8 cm)离心15 min,上清液用微孔滤膜滤过。取滤液,加入冰乙酸、甲醇定容,摇匀,用微孔滤膜滤过。取滤液,采用高效液相色谱法测定药物的溶解度。 2.2 不同药物干预zsx的原头和囊泡的测定 细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡含20% 胎牛血清(FBS)、1%青、链霉素的RDMI 1640培养液中,于37 ℃、5% CO2条件下培养。分别用DMSO、吐温80和二者混合溶液溶解ABZ和ABZSX,使药物溶液达到过饱和,经0.22 μm微孔滤膜滤过后备用。实验共设20组,原头蚴干预组和囊泡干预组各10组。即分别用DMSO、吐温80和二者的联合溶液溶解的ABZ和ABZSX干预的原头蚴和囊泡组,原头蚴和囊泡的助溶剂对照组,1% DMSO组、0.1% 吐温80组,1% DMSO+0.1%吐温80溶液组以及空白对照组(原头蚴及囊泡)。原头蚴每组约3 000个,置含25 ml RDMI 1640培养液的培养瓶中进行培养。囊泡每组约40个,置含50 ml RPMI1640培养液的培养瓶中进行培养。将上述药物溶液分别加入原头蚴和囊泡的药物干预组培养液中,使培养液中的3种助溶剂浓度分别为1%、0.1%和1%+0.1%,药物浓度为以上浓度助溶剂溶解的饱和药物浓度。吐温80组加入占总溶液体积0.1%的吐温80,DMSO组中加入总溶液体积1%的DMSO,联用助溶剂组加入占总溶液体积1.1%的吐温80和1%的DMSO混合溶液,空白对照组加入相应体积的蒸馏水。每组设2个平行组。原头蚴组隔1 d涂片观察1次:取各药物干预组培养液1 ml,用0.1%伊红溶液染色3～5 min,待原头蚴沉淀后涂片,倒置显微镜下观察计数,死亡原头蚴头节红染,伴有结构破坏且无活动性;活头节拒染不着色,且有活动性或分泌活动。每次每组计数原头蚴约200个,计算原头蚴死亡率,实验周期为10 d。囊泡组每5 d观察1次:取各组培养瓶在倒置显微镜下观察,记录该组全部囊泡的塌陷情况,实验周期20 d。 2.3 统计分析 应用SPSS17.0统计软件,计