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mdivi-1减轻a诱导的小胶质细胞氧化应激损伤 阿尔茨海默病（ad）是一种发育于中老年人的中枢神经系统退行性疾病。临床特点是进展性认知障碍、记忆力低下和个性改变。β-淀粉样蛋白 (β-amyloid, Aβ) 的生成和清除失衡, 形成老年斑是AD的主要病理学改变, 在AD的发生发展中起关键性作用。小胶质细胞在帕金森病多巴胺能神经元特异性死亡机制中扮演着重要的角色, 同时Aβ沉积激活小胶质细胞诱发的脑内炎症反应和神经毒性作用亦是AD的核心病理机制。由于肩负着为细胞活动提供能量和信号转导等重要作用, 近年来线粒体成为多种疾病的研究热点。线粒体在细胞内频繁发生融合与分裂, 动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1, Drp1) 是线粒体分裂调控关键蛋白, 而线粒体分裂蛋白抑制剂 (mitochondrial division inhibitor, mdivi-1) 是一种Drp1选择性抑制剂, 通过抑制GTP酶的活性来发挥抑制Drp1功能的作用。已有研究报道, mdivi-1可减轻心肌缺血再灌注损伤和急性肾损伤中的细胞凋亡。笔者前期研究也发现mdivi-1对Aβ诱导的BV-2小胶质细胞凋亡具有保护作用, 但在Aβ诱导原代小胶质细胞损伤中的作用尚未见报道。本实验通过观察mdivi-1预处理对Aβ诱导的BALB/C小鼠原代小胶质细胞氧化应激损伤的影响, 探讨mdivi-1对Aβ诱导原代小胶质细胞损伤是否具有保护作用。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 实验动物 BALB/C新生1 d小鼠, 购自郑州大学动物实验中心。 1.1.2 抗菌剂和试剂 DMEM培养基、胎牛血清 (购于美国Gibco公司) ;Aβ (购于美国Simga公司) ;Mdivi-1 (购于美国ENZO公司) ;蓖麻凝集素-1 (ricinus communis agglutinin-1, RCA-1) 抗体 (购于美国Vector公司) ;Annexin V-FITC/PI双染凋亡检测试剂盒 (购于美国Beckman Coulter公司) ;全蛋白提取试剂盒、丙二醛 (malondialdehyde, MDA) 测试盒、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD) 测试盒和8-羟脱氧鸟苷 (8-hydroxy-desoxyguanosine, 8-Ohd G) 测试盒 (购于南京建成生物有限公司) ;罗丹明123 (购于美国Solarbio公司) 。 1.2 方法 1.3 单因素方差分析 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析, 计量结果以 (均数±标准差) (ue0af±s) 表示, 单因素方差分析 (one-way analysis of variance, one-way ANOVA) 及Newman-Keuls检验, P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 细胞浆内溶酶体 纯化后的小胶质细胞的细胞体较大, 突起大多较短, 形态多呈多角形或椭圆形, 部分为圆形或柱状, 细胞浆内溶酶体含量较多, 折光性比较强, 见图1A。采用小胶质细胞的细胞浆标志物RCA-1鉴定小胶质细胞纯度, 结果显示绝大部分细胞均可着色, 纯化率95%, 可用于后期试验, 见图1B、图1C。 2.2 细胞存活率 MTT结果显示, 与con组比较, mdi组差异无统计学意义, Aβ组小胶质细胞存活率明显下降, 差异有统计学意义 (P0.05) ;与Aβ组比较, Aβ+mdi组小胶质细胞的存活率明显提高, 且当mdivi-1浓度为10μmol/L时细胞存活率最高, 差异有统计学意义 (P0.05) , 见图2。 2.3 两组小胶质细胞凋亡的比较 流式细胞术结果显示, 与con组比较, mdi组差异无统计学意义, Aβ组小胶质细胞凋亡增加, 差异有统计学意义 (P0.05) ;与Aβ组比较, Aβ+mdi组小胶质细胞凋亡减少, 差异有统计学意义 (P0.05) , 提示mdivi-1抑制Aβ引起的原代小胶质细胞凋亡增加, 见图3。 2.4 电位下降的比较 流式细胞术结果显示, 与con组比较, mdi组差异无统计学意义, Aβ组小胶质细胞线粒体膜电位下降, 差异有统计学意义 (P0.05) ;与Aβ组比较, Aβ+mdi组小胶质细胞线粒体膜电位升高, 提示mdivi-1抑制Aβ引起的原代小胶质细胞线粒体膜电位下降, 且mdivi-1浓度为10μmol/L时缓解最明显, 差异有统计学意义 (P0.05) , 见图4。 2.5 -ohdg及sod含量 与con组比较, mdi组差异无统计学意义, Aβ组原代小胶质细胞MDA和8-OHd G含量明显升高, SOD含量明显下降, 差异有统计学意义 (P0.05) ;与Aβ组比较