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猪氏杆菌病的诊断与防治
李先生的细菌病是由缺血引起的,同时伴有内脏器官和中枢神经系统的病变。其病因是李先生菌。这是一种阳性的革兰氏阳性杆菌。需要氧或多氧基氧,没有发芽和副作用。病菌在pH值为5.0以下缺乏耐受性, p H值5.0以上才能繁殖, 至pH值9.6仍能生长。对热的耐受性比大多数无芽孢杆菌强, 常规巴氏消毒不能杀灭, 65℃经30~40 min才能杀灭, 一般消毒药都易使之灭活。
2011年10月份邯郸市某规模养猪场发生了临床症状为猪只食欲下降、体温增高、运动失调、四肢发生麻痹、腹泻、妊娠母猪发生流产等现象的疾病, 并且死亡率高。为查找病原, 笔者采集了有关病料进行了病原分离、鉴定, 并进行了动物回归试验。现将有关情况报道如下。
1 材料和方法
1.1 养基的配制和分组
病料来源于邯郸市某规模化猪场发病猪。
普通营养琼脂培养基、生化培养基、普通巧克力琼脂平板等按常规方法配制, 生化试验鉴定培养基参照姚火春2002年出版的《兽医微生物学实验指导》的方法配制。
试验动物为6周龄健康BALB/C小鼠。
仪器设备有台式离心机 (上海安亭科学仪器厂) 、超净工作台 (哈东联仪器设备厂) 、高压灭菌锅 (上海三申医疗器械有限公司) 、恒温振荡器 (上海智城分析仪器制造有限公司) 、恒温培养箱 (上海福玛实验设备有限公司) 、干燥箱 (浙江省嘉兴市新胜电器厂) 。
1.2 方法
1.2.1 疾病数据的保存
无菌取病猪胸水、腹水、心包腔渗出物等接种于巧克力培养基上, 37℃培养48 h。
1.2.3 片镜检观察
无菌采集病猪鼻腔、肺脏、胸膜、胸腹腔积水、心包积液、心血、关节液和脑组织等病料, 分别接种于自制的巧克力琼脂平板上, 37℃培养24 h, 观察结果并涂片镜检。将分离的细菌分别接种于营养肉汤、普通琼脂培养基、血琼脂平板上各2份 (各取1份置于5%~10%CO2中培养) , 37℃恒温箱培养24~48 h后, 检查其在培养基上的生长表现、菌落特征以及在血琼脂平板上的溶血性等培养特性。
1.2.4 生长特性及对因子的需要性
将分离的细菌分别接种于普通巧克力琼脂、高压巧克力琼脂 (只含X因子, 121℃加热30 min可破坏巧克力琼脂中Ⅴ因子) , 37℃恒温箱培养24~48 h后, 检查其生长特性及对Ⅴ因子的需要性。
1.2.5 细菌分离结果
将鲜血琼脂平皿平分为两部分, 分别接种所分离的细菌。然后在其中一部分划线接种金黄色葡萄球菌, 37℃培养24~48 h, 观察其是否在葡萄球菌周围长出“卫星现象”。
1.2.6 出生评估
将分离所得纯培养物分别接种于葡萄糖、蔗糖、甘露醇等生化培养基上, 37℃培养24~48 h后观察结果。
1.2.7 细菌分离和染色镜检
取6周龄健康小鼠16只, 8只腹腔注射肉汤纯培养物0.5 m L/只, 8只注射营养肉汤作为对照。采取心血、肝脏涂片染色镜检, 分析染色细菌的特征。
根据临床、剖检及菌株的培养特性、病原学分析、生化试验和动物接种试验综合比较, 参照《伯杰氏细菌鉴定手册》, 作出综合判断。
2 结果
2.1 革兰阳性杆菌
对不同组织、部位所取的病料, 经染色后均见到革兰阳性的杆菌。菌体形态在多数情况下呈粗大棒状单独存在, 或成“Ⅴ”字形, 或形成短链。所查组织中, 以心包膜和关节腔渗出物细菌最为密集。
2.2 李氏杆菌培养
在自制的巧克力培养基上培养24~48 h, 菌株生长良好, 形成针尖大小、圆形、透明、光滑湿润的菌落;钓取菌落染色镜检, 符合李氏杆菌的形态和染色特征。在普通肉汤和营养琼脂中37℃培养24 h后, 可见菌液浑浊。在血平板上培养48 h, 可见有圆形、边缘整齐、蓝灰色透明的菌落生长, 表现β溶血现象, 在半固体培养基中穿刺37℃培养24 h, 沿穿刺线呈云雾状, 后缓慢扩散, 在培养基表面下3~5 cm处呈伞状, 涂片镜检, 形态和染色特征与直接涂片一致。
2.3 菌株的生长特性
李氏杆菌耐碱不耐酸, 在55℃湿热中经40 min或常用消毒液5~10 min能杀死。本菌在培养基上能存活数月, 抗干燥能力强, 低温可延长其存活时间。在饲料中, 夏季存活1个月, 冬季可存活3~4个月, 在pH值为5.0~9.0的环境, 1年后仍可检出。
2.4 糖酸糖的分解
由表1可知, 李氏杆菌在37℃培养24 h可以分解果糖、鼠李糖、葡萄糖, 产酸不产气;不分解木糖、甘露醇、棉籽糖、甘露糖;不产生吲哚和硫化氢;但甲基红阳性。
2.5 细菌分离后相同形态、染色特征的细菌存
试验显示接种细菌组的小鼠死亡且均呈败血症状。采取心血、肝脏涂片染色镜检, 均发现与初次分离时相同形态、染色特征的细菌存在。根据临床、剖检及本菌株的培养特性、病原学分析、生化试验和动物接种试验综合所见, 参照《伯杰氏细菌鉴
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