荧光定量PCR在临床医学中的应用.pptVIP

HBV DNA检测的临床意义 HBV DNA是HBV存在最直接的依据 HBV DNA是HBV复制的标志 HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎 当前第30页\共有73页\编于星期日\14点 　　 提供直接证据缩短“窗口期” 　PCR检测 “窗口期” 核酸检测缩短的“窗口期”的天数 HBV 56 6-15 HCV 70 41-60 HIV 22 10-15 有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断 HBV DNA检测的临床意义 当前第31页\共有73页\编于星期日\14点 HBV DNA检测的临床意义 调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。 当前第32页\共有73页\编于星期日\14点 HBV DNA检测方法 斑点杂交（基本淘汰） 定性PCR（基本淘汰） 荧光定量PCR（主流） 基因芯片（将来？） 当前第33页\共有73页\编于星期日\14点 为什么建议病人要进行HBV DNA检测？ 当前第34页\共有73页\编于星期日\14点 荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期 血清标本 Copies/ml HBeAg阳性慢性乙型肝炎病人 8.3 x 108 经α干扰素治疗后HBeAg转阴 6.2 x 103 非活动性HBsAg携带者血清 5.6 x 103 原先血中HBV DNA阳性，已痊愈超过12个月的血清 103 当前第35页\共有73页\编于星期日\14点 当前第36页\共有73页\编于星期日\14点 HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？ 干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。 PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。 病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。 当前第37页\共有73页\编于星期日\14点 乙肝的治疗 目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。 目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类： ?干扰素：重组人α-1b干扰素、α- 2a、 α-2b干扰素等。 核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。 当前第38页\共有73页\编于星期日\14点 乙肝的治疗 主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等 对于HBV DNA≥105的患者应进行抗病毒治疗 当前第39页\共有73页\编于星期日\14点 拉米夫定 可迅速降低HBV DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻断肝纤维化的进程，终止肝硬化的发展。 尤其是拉米夫定不受病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。 此外拉米夫定还能抑制肝移植受体和AIDS病人体内的HBV复制。 当前第40页\共有73页\编于星期日\14点 拉米夫定治疗人群 有明显HBV DNA复制者 前C区变异的慢性乙型肝炎 代偿期的慢性乙型肝炎 接受肝脏移植的患者 干扰素治疗失败 当前第41页\共有73页\编于星期日\14点 拉米夫定治疗效果 绝大多数患者HBV DNA水平显著下降。 用药4周开始下降，12至16周约半数以上的病例血清HBV DNA降到可检测水平以下。 治疗1年后HBeAg阴转率约为20%。 当前第42页\共有73页\编于星期日\14点 病毒学应答：HBV DNA低于检测下限 血清学应答 生化学应答 组织学应答 应用抗病毒药物后如何判断疗效？ 当前第43页\共有73页\编于星期日\14点 应用抗病毒药物后如何判断疗效？ 治疗结束时完全应答 随访1年持续应答 无应答 当前第44页\共有73页\编于星期日\14点 YMDD变异 YMDD：酪氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天 门冬氨酸 蛋氨酸（M）突变为异亮氨（I）或缬氨酸（V）形成YIDD变异株或YVDD变异株 。 抗病毒治疗中存在的问题 当前第45页\共有73页\编于星期日\14点 HBV-YMDD变异检测的临床意义 动态检测：服用拉米夫定3个月开始，每月 检测1次 提前发现：可在耐药临床表现发生前1-4个 月检测出突变株 及时调整：适时调整用药方案，防止因耐 药而导致病情