土壤微生物代谢多样性BiologECO板碳素利用法.docVIP

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2023-08-24 发布于浙江
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土壤微生物代谢多样性BiologECO板碳素利用法.doc

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土壤微生物代谢多样性——Biolog ECO板碳素利用法步骤: 土壤稀释液的制备 (1)称取KH2PO42.654g, K2HPO46.962g,加超纯水至1L,调pH值至7.0即得0.05mo1/L磷酸缓冲液,灭菌,备用 (2)称取相当于10g烘干重新鲜土样于灭菌三角瓶中,加90mL灭菌磷酸缓冲液,盖橡皮塞封口,于25 ℃ , 200rpm条件下黑暗振荡60min (3)超净工作台上静置10min,使大的土壤颗粒沉淀下来,取1ml悬浮液转入含有9m1灭菌缓冲液的试管中,得到10-2土壤稀释液,然后再次稀释制备10-3土壤稀释液。 ELISA反应 (1)将Biolog ECO微平板从冰箱中取出,室温下预热到25 ℃; (2)将10-3土壤稀释液在超净工作台上倒入已灭菌的V型槽中,使用8通道移液器从V型槽移取稀释液,向Biolog微孔板的每个微孔中注入150 u L稀释液,每个处理设3个重复,即每个土壤样品使用一个Biolog ECO微平板,因为该微孔板上自带3各重复 (3)将接种的Biolog ECO微平板放在恒温培养箱(25士1℃)中培养,温育过程中分别于4, 24, 48, 72, 96, 120, 144和168h用BIOLOG读数仪在590nm下测定吸光值。