支原体检测PCR方法.docxVIP

PCR法检测支原体 实验原理： 经过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时经过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性的复制，而后经过琼脂糖电泳观检测，会跑出条带出现阳性 结果。反之当没有支原体污染时，因为没有模板，PCR没法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果，为保证PCR法的精准性，故需要找到最优的PCR条件在进行检测。 实验目的： 检测培育的细胞能否有支原体污染。 实验资料： 0.5mlEP管；PCR管；镊子；手套；口罩；EP管架；移液枪（100ul，10ul）及配套枪头(黄、白)；ddH2O；上下游引物（两组）；dNTPs；10xBuffer；EasyTaq；冰盒；琼脂糖；锥形瓶（200ml）；量筒（50ml）；全套琼脂糖电泳设施（电泳槽， 制胶槽，梳子，电源输出）；凝胶成像系统； PCR引物： LZY-5Mycouniversal：FGGGGAATGGGTGAGTAACACG LZY-5Mycouniversal：RCGGATAACGCTTGCGACCTATG 产物大小：500bp LZY-6mycotestF：GGGAGCAAACAGGATTAGTATCCCT LZY-6mycotestR：TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC 产物大小：250bp 实验步骤： 1、取样： 直接取培育细胞的培育基上清。 2、PCR（为25ul系统） 1、配