免疫学实验血清学反应.pptVIP

免疫学实验血清学反应;【基本要求】; 指抗原Ag与相应抗体Ab之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内，也可发生于体外。 ;体内反应可介导杀菌、溶菌、调理、中和毒素等作用免疫病理损伤—超敏反应、免疫性疾病等;3D模型 IgG1;二、血清学反应的特点：;2、可逆性：抗原与抗体的结合是非共价键结合，在一定条件下又可解离为游离状态，反应具有可逆性。 ;3、可见性：反应体系中抗原抗体的比例适当，就能形成较大的抗原抗体复合物，在有一定量电解质或适宜pH等条件下，出现肉眼可见的凝集、沉淀等可见反应。;*;4、阶段性：抗原抗体反应分两个阶段： 抗原抗体发生特异性结合的阶段，反应快，几秒或几分钟，不可见 可见阶段，短至数分、数小时，长至数日，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象 ;概念：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。;三、血清学反应的影响因素;*;（2）酸碱度;（3）温度—影响反应速度;抗体的两个Fab段分别 结合两个Ag分子，相互 交叉结合连接成巨大的网格状立体聚合物，（可见）。;*;（一）凝集反应 1、定义： 颗粒性抗原（如细菌、红血球等） +抗体→凝集现象。 颗粒性抗原与相应的抗体在体外结合，在电解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块，为凝集反应，反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。 ;2、分类 （1）直接凝集反应 ①概念：天然的凝集原与相应抗体直接结合呈现的细菌凝集或红细胞凝集现象称为直接凝集反应。 ②应用： 定性检测—ABO血型鉴定、细菌鉴定 定量检测—诊断伤寒病的肥达试验等;*;（2）间接凝集反应（3）间接凝集抑制试验 ;（二）沉淀反应;*;1%琼脂凝胶的孔径约85纳米，可允许各种Ag或Ab自由扩散，由近及远形成浓度梯度。;②火箭免疫电泳;*;(1) 沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。 (2) 沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。 (3) 沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。 (4) 沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较???。;④免疫电泳⑤对流免疫电泳;（三）中和反应：特异性抗体抑制多种抗原的生物学活性（细菌外毒素的毒性、酶的活性、病毒的感染性等）的反应。 主要用于毒素的鉴定、病毒感染性疾病的诊断以及病毒的鉴定。例如在临床实验诊断中测定风湿病患者体内的抗链球菌 O抗体的反应。 ;*;*;由抗原抗体复合物结合C1q启动的途径 1. 激活剂 Ag-Ab复合物(IgG1,IgG2,IgG3,IgM) 2. 参与成分 C1～C9 3. 激活过程（三个阶段） 识别阶段 活化阶段 膜攻击阶段 ;*;1、酶免疫测定（Enzyme immunoassay,EIA);*;2、放射免疫测定法（RIA）： ;3、免疫荧光技术;*;;*;*;二、双向扩散试验——检测血清中的AFP（1份/2人） 【操作方法】 1. 双向琼脂扩散试验抗原抗体孔位置如下图所示 2. 用微量加样器孔中分别加抗甲胎蛋白诊断血清，周围孔 中分别加入待测血清和阳性对照血清，每孔加入25-30μl。 3. 将琼脂板放入密闭的盒内（内放浸有5%石炭酸的纱布以保持湿度），置37℃温箱中，于24小时后观察结果。;*;一、分析上次结果;2、试验管从第一管看起，管底有凝集块，边缘不整或卷起等现象，均为阳性反应，分别用（++++）、（+++）、（++）、（+）表示凝集程度。 （++++）表示血球100% 凝集，红细胞形成片层凝集，均匀布满管底或边缘皱缩如花环状； （+++）表示血球75% 凝集，红细胞形成片层凝集，面积略多于（++）； （++）表示血球50% 凝集，红细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松散； （+）表示血球25%凝集，红细胞沉于管底，周围有散在的少量凝集。 ;3. 按下列标准判定，记录结果。 ++++：凝集特别显著，红细胞均匀地铺于管底，呈一薄层边缘有折迭状。 +++：凝集显著，红细胞均匀地铺于管底呈一薄层，但周边红细胞凝集较疏松。 ++：凝集清楚可见，红细胞平铺于管底呈一薄层，中央可明显见到一疏松的红点。 +：红细胞大部分沉集于管底成圆点状，周围有少量凝集的红细胞。 —：红细胞全部沉集于管底呈圆点状，四周液体清晰。 4. 判断效价：能见到明显凝集现象（++）的血清最高稀释度为该血清对1%绵羊红细胞的凝集效价（或滴度）。一般以出现 ++ 凝集反应的最高血清稀释倍数作为血清中所含凝集抗体的效价。;（二）双向扩散（沉淀反应）：观察结果并分析 观察各孔之间有无白色沉淀线，根据他们的关系判断结果。 在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀