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第 第 PAGE 1 页 利用 PCR 技术扩增目的基因表述题 1、PCR 技术由谁发明的？ 穆里斯 2、PCR 是一种什么技术？ 是一项在生物体外复制特定DNA 片段的核酸合成技术 3、PCR 技术的目的是什么？ 通过指数式扩增获取大量的目的基因 4、PCR 技术的原理是什么？扩增的基因形态如何？ DNA 双链复制两种形态：一是从生物体的DNA 上剪切下来，一是逆转录得到的基因 5、PCR 扩增目的基因的前提是什么？为什么？ 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 目的是根据这一序列合成引物 6、PCR 技术为什么要有引物？引物的作用是什么？ DNA 聚合酶只能从 5 端向 3 端延伸DNA 链，且只能将单个脱氧核苷酸连接到已知的DNA 片段上作用：结合在模板DNA 上，提供DNA 延伸起始位点 7、体内 DNA 复制和 PCR 技术的引物有什么不同？ 体内的引物是RNA，完成复制后要切除。 PCR 技术的引物是DNA，完成复制后不用切除。 （体外不用RNA 的原因是体外温度变化比较大，用RNA 会变性） 8、PCR 技术为什么要用两种不同的引物？且两种引物不能存在互补配对的序列，原因是什么？ 用两种引物才能确保DNA 的两条链同时被扩增 避免引物自连，从而导致引物不能同模板DNA 结合，最终使链式反应不能进一步进行 9、写出 PCR 扩增的过程？ ①变性（DNA 双链解开）： 模板DNA 加热至 90-95℃，使H 键断开，DNA 成为单链后与引物结合 ②退火（也称复性，引物与DNA 单链结合）： 温度降至 55~60℃左右,引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合； ③延伸（新DNA 单链延伸）： DNA 模板--引物结合物在DNA 聚合酶的作用下,于 70-75℃左右,以dNTP 为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链. 10、体内 DNA 复制和 PCR 技术的异同有哪些？ 温度不同：体内温度一般恒定， PCR 的温度高且有变化 酶不同：体内要DNA 解旋酶、DNA 聚合酶， PCR 需要Taq 酶（中文名称最好记下来） 引物不同：体内为RNA（身身合成）， PCR 为 DNA，且要两种不同的引物。 解旋方法不同：体内用解旋酶， PCR 用温度使H 键断裂 引物是否要去除：体内要，PCR 不用相同点：模板，原料，方向及配对原则相同相关回答的小问题 1、PCR 技术中所用的 DNA 聚合酶与生物体内的 DNA 聚合酶有什么区别？ PCR 技术中所用的DNA 聚合酶可以耐高温 2、在 DNA 聚合酶的作用下，两条子链的延伸方向是什么？ 从子链的 5 端向 3 端延伸 3、PCR 技术中的变性和延伸的实质分别是什么？ 变性：DNA 双链解旋 延伸：以DNA 单链为模板，按碱基互补配对原则合成子链的过程 4、PCR 与人体内 DNA 复制相比有何特殊之处？（一般记住两点即可） PCR 技术是离体条件，需要高温，酶要耐高温，引物不需切除 5、PCR 技术需要的条件有： DNA 模板，原料(四种脱氧核苷酸dATP,dTTP,dCTP,dGTP，) Taq 酶，两种引物 另外还需要：液体环境，适宜的温度，一定的酸碱度（缓冲液含Mg2+） 6、PCR 开始时加热到 94℃的目的是什么？ 使 DNA 片段的氢键断裂 7、若要检测一个人是否感染了艾滋病毒病毒，你认为是否可以用到PCR 技术？ 可以，若感染了艾滋病毒，则血液中有HIV 病毒，可以用PCR 技术来扩增艾滋病毒的RNA 8、引物判断 9、引物的化学本质是什么？ 一小段单链DNA 或者RNA 10、PCR 技术是否需要加入ATP？ 不需要额外单独加入ATP，因为 dNTP 水解后会产生 11、PCR 复制的结果情况 （第一次复制） ① （第二次复制） ② 注意：1）①复制后得到③④，②复制后得到⑤⑥ 只有④的 35 和⑤的 53 这两段才是目的基因的片段 第二次复制后得到的四个片段都还不是基因X （第三次复制） ③复制得到A（二个） ⑤复制得到B（二个） ④复制得到C（二个） ⑥复制得到D（二个） 注：1）复制三次后，只有C 上和B 下才是目的基因X，所以三次复制后只得到 2 个目的基因2）如果进行第四次复制：（可以得到 8 个目的基因） A 下可得一个目的基因， B 上得一个，B 下得二个 C 上得二个，C 下得一个 D 上 得 一 个3）从第三交复制结果可以看出，不是目的基因X 的单链片段是 8 段（A 上两条，A 下一条，B 上一条，C 下一条，D 上一条，D 下二条）所以不管接下来复制