多肽类药物长效化技术的研究进展.docxVIP

多肽类药物长效化技术的研究进展 近年来，作为引起国内外药物学术界关注的课题，多媒体药物已被广泛用于癌症、艾滋病和其他疾病的治疗。 多肽类药物虽然安全、生物活性好,但多数因半衰期较短而需频繁给药,这使病人的依从性大大降低,并且治疗费用也较大,因此,为了保持药效的持久、不用频繁给药,对于长效多肽类药物的研发近年来成为了多肽药物领域的研究热点。多肽类药物的长效化技术主要有体外化学修饰技术、生物技术和缓控释制剂技术。体外化学修饰技术是在多肽水平上,使用合适的修饰方法和修饰剂对其进行化学修饰,使修饰后的多肽类药物在体内的半衰期延长。该技术主要包括主链末端的修饰、侧链的修饰、环化、氨基酸替换、糖基化修饰及PEG修饰等。 1 c端酰胺化及糖基化化合物 多肽类药物常用的主链末端修饰方法是N端的乙酰化作用和C端的酰胺化作用,分别对肽链两端氨基和羧基进行保护,使多肽不会很快地被相应的多肽蛋白酶降解。目前这一技术已经广泛应用于多肽的化学合成中。N端乙酰化通常是在固相合成多肽反应的整个肽链组合完毕后,加入乙酸酐使其乙酰化。C端的酰胺化则是通过选择裂解产物为酰胺的树脂或者选择不同裂解方式来完成。Brinckerhoff等通过对具有免疫原性的多肽MART-I27-35 进行N端的乙酰化或者C端的酰胺化,明显提高了该多肽在血浆中的稳定性。 主链末端连接不同长度的脂肪酸、主链C端或N端的PEG修饰及糖基化修饰,其基本原理都是增加多肽分子的相对分子量和空间位阻,提高其对多肽水解酶的稳定性,减少肾小球的滤过作用。RC-160是一种具有抗增生活性的生长激素抑制剂类似物。Dasgupta等将各种长度的脂肪酸连接在RC-160的主链末端。与未修饰的RC-160相比较,修饰后的RC-160对于胰岛素有更高的抵抗能力和更长的半衰期。 2 固相多肽的制备 多肽侧链基团的化学修饰是通过选择性试剂(也称修饰剂)与多肽侧链上特定的功能基团发生化学反应而实现,从而改变多肽的化学性质,如消除免疫原性和免疫反应性、延长了多肽药物在体内的作用时间等。David Sabatino等在对生长激素释放多肽(growth hormone releasing peptide,GHRP-6)类似物的合成研究中,通过对Trp2、Ala3、Trp4的化学修饰,在侧链上连接不同的基团(如图1所示),从而形成氮杂多肽(aza-peptide)。在考察经修饰的各种氮杂多肽的IC50时,发现其中一种结构为His-D-Trp-Ala- azaPhe-D-Phe-Lys-NH2的氮杂多肽与受体的结合率是未经修饰的GHRP-6的1 000倍。 正交保护氨基酸在固相多肽合成中的应用对多肽的侧链修饰起着重要的作用。正交保护是指在一定条件下,分子中的一组保护基可以被选择性地脱除,而其他保护基不受影响,进而达到可选择性修饰的目的。谢东等在合成的长效HIV融合抑制剂艾博卫泰中,对第13位的赖氨酸(Lys)采用Alloc保护的Fmoc-Lys(Alloc)-OH,用特定的条件选择性地脱除保护基Alloc,而另一氨基保护基Fmoc和肽链上其他氨基酸的侧链保护基均不受影响,再用Fmoc-AEEA(Fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸)和MIPA(3-马来酰亚胺基丙酸)对Lys13进行修饰,使肽链进入血液后能够迅速与白蛋白结合,从而发挥长效的作用。经临床实验验证,艾博卫泰的半衰期可长达2周。 对肽链中某一个氨基酸进行定点修饰是侧链修饰的一项前沿的、重要的技术,也是实现侧链修饰可控的保证。Peng Wu等报道了重组蛋白在哺乳动物细胞中表达,通过基因编码乙醛标记可对重组蛋白中的某些特定位点进行特异性的乙醛标记,这些乙醛标记既可作为定点修饰的位点,也可用于进一步的化学修饰。这项技术已应用在对单克隆抗体、多肽类药物等的定点修饰中。 3 调节因子t对多肽形成的影响 在多数情况下,机体内的氨肽酶及羧肽酶很容易从常见的直链肽的两端进行逐步的切割分解,使直链肽被降解,因此,对肽链进行环化结构改造,可以提高多肽类药物在机体内的生物稳定性,延长半衰期。按照桥头环化位置可将环肽分为5类:C端与N端相连、侧链间相连、N端与侧链相连、C端与侧链相连以及主链上的N-N相连,如图2所示。 生长调节因子(growth regulating factor,GRF)是由29个氨基酸组成的多肽,肽序为YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLL QDIMSR。该多肽在37 ℃的猪血浆中的半衰期只有15 min。研究人员选取不同位点进行环化处理,得到不同的衍生物,实验结果如表1所示,其半衰期明显提高到4 h以上。 Annett Rozek等报道了一吲哚类多肽类似物CP-11,结构为ILKKWPWWPWR RK-NH2,通过二硫键进行成环修饰,得到cycloCP-11,