高效液相色谱法测定棉花胚性愈伤组织中内源激素的变化.docxVIP

高效液相色谱法测定棉花胚性愈伤组织中内源激素的变化 植物胚胎的出现受到多种因素的影响，这是体内外部因素综合调节的过程。培养过程中内源激素、酶的种类和活性变化等因素对植物离体再生起重要作用。植物激素对植物再生体系的建立有着重要的作用,这已有较多文献涉及。但是在棉花离体培养研究中,以往只注重于对培养基的筛选和培养条件的作用探讨等方面,而对棉花离体培养过程中的形态建成和内部生理变化机制的关系研究不多。我们拟通过研究棉花离体培养过程中愈伤组织的不同内源激素的含量变化,分析激素变化与棉花胚性愈伤组织发生过程的关系,为棉花高效离体培养体系的建立和遗传转化奠定基础。 植物激素的高效液相色谱(HPLC)测定已有许多报道,但用于棉花多种内源激素分离、测定的国内报道较少,特别是对于愈伤组织中内源激素的测定未见报道。我们采用高效液相色谱法对棉花胚性愈伤组织发生过程中吲哚-3-乙酸(IAA)、玉米素(ZT)、赤霉素(GA3)和脱落酸(ABA)等4种植物内源激素进行了分离和测定,探索出一套棉花内源激素分离和测定的方法,从而为棉花组织培养过程中内源激素的研究提供关键技术方法。 1 材料和方法 1.1 试剂与标准品 以百棉1号为材料,在棉花体细胞胚胎发生过程中,挑选苗期、愈伤组织时期、胚性愈伤时期、胚状体时期材料,经液氮速冻后放入超低温冰箱(-80℃),保存待用。 IAA、ZT、GA3、ABA标准品均购于Si