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不同干燥温度和采收时间对连钱草总黄酮含量的影响 连草是嘴唇科植物的血灵丹（nakai）kubr。地上部分,具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功效,临床上用于治疗热淋、湿淋、湿热黄疸等疾病。我国连钱草资源十分丰富,几乎遍布于全国各地,湖北省是主要产地之一,而对湖北产连钱草的研究却较少。故本实验通过考察不同干燥温度和不同采收时间对连钱草中总黄酮含量的影响,为湖北省连钱草资源的采收加工和开发利用提供实验依据。 1 药品、试剂和仪器 连钱草于4—10月采于武汉市洪山区,经中南民族大学万定荣教授鉴定,连钱草为唇形科植物活血丹(Glechome longituba(Nakai)Kupr.)地上部分;芦丁对照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所提供);其它试剂均为分析纯。紫外可见分光光度计(T6新世纪,北京普析通用仪器公司),DZ-1BC型真空干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)。 2 方法和结果 2.1 干燥温度对货币牧场总黄酮含量的影响 2.1.1 不同种类干品的制备 实验用连钱草于2009年4月中旬采得,除杂后分为5批,每批100g左右,剪碎,分别于80℃、60℃、40℃、室温干燥制备干品,有1批为鲜品直接进行总黄酮的提取。 2.1.2 标准曲线的制备 精密称取(减压干燥)芦丁对照品5mg,置于25m L的容量瓶中,加60%乙醇约15m L,超声使其溶解,放冷,60%乙醇定容至刻度,摇匀,得芦丁标准溶液(0.200mg·m L-1)。 2.1.3 测量波长的选择 根据相关文献,选择测定波长为510nm。 2.1.4 总氮、总氮含量测定波长5.2m 精密量取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m L分别置于25m L的容量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液1m L,摇匀,放置6min,加10%三氯化铝试液1m L,摇匀,放置6min,再加5%的氢氧化钠10m L,加水至刻度,摇匀,以第1管为空白对照,于波长510nm处测定吸光度。绘制浓度—吸光度曲线,求得回归方程为:Y=0.0114X-0.0065,R2=0.9992。 2.1.5 总黄酮含量的测定 分别精密称取各样品(以鲜品计为10g),置圆底烧瓶中,加入100m L60%乙醇,水浴加热回流60min后过滤,提取2次,合并2次滤液,静置24h后,过滤,滤液以蒸馏水定容至500m L,即得供试品溶液。 精密量取供试液3.0m L,然后按标准曲线制备项方法进行总黄酮吸光度的测定,带入芦丁标准曲线方程得出质量浓度,然后计算各提取液中总黄酮的含量(以芦丁计),即为总黄酮的百分含量。测量结果见表1。 2.2 收集时间对金钱和草的总黄酮含量的影响 2.2.1 包括金钱草的收获 采收期为2009年4—10月,每月15日。 2.2.2 试验溶液的制备和测定 分别精密称取各样品10g,具体操作方法参照本文2.1.5项,实验结果见表2。 2.3 方法的准确性试验 2.3.1 总黄酮含量测定 取4份60℃下烘干所制备的试样液,按标准曲线项下方法,自“分别置于25m L的容量瓶中”起,同法操作,对试样液中总黄酮含量进行平行测定。结果表明,RSD为0.92%(n=5),说明该测定方法精密度良好,符合含量测定要求。 2.3.2 同时间后总黄酮含量的测定 按标准曲线项下方法,在同一实验室、不同时间对样品中总黄酮含量进行5次重复测定。实验结果显示5次测定的相对标准偏差为0.39%,说明该方法重复性好。 2.3.3 容量瓶吸光度测定 取60℃下烘干所制备的供试品溶液3.0m L,按标准曲线项下方法,自“分别置于25m L的容量瓶中”起,同法操作,并每隔5min测定1次吸光度,共测定20min。结果表明,供试品溶液与三氯化铝形成的红色络合物不够稳定,显色20min后吸光度由0.430下降到0.397,下降约3.20%,故建议显色定容后立即测定。 2.3.4 总黄酮含量测定 准确称取5份已知总黄酮含量的样品,加入一定量的芦丁标准品,按标准曲线项下方法测定总黄酮含量。结果显示,平均回收率为97.59%,RSD为0.99%,说明回收率较好。 3 干燥时间和收购时间 湖北省连钱草资源丰富,但对其所含成分的研究报道较少。本实验考察了不同干燥温度及不同采收期对连钱草总黄酮含量的影响,结果表明:干燥温度和采收时间明显影响连钱草的总黄酮含量,干燥温度越高,总黄酮含量越低,鲜品中的总黄酮含量明显高于干品。如果只考虑总黄酮,连钱草药材以产地加工为好。 《中国药典》一部(2005年版)规定连钱草春至秋季采收,也有资料记载全年皆可采收。本文探讨了湖北产连钱草4—10月的总黄酮含量变化,其中4—6月连钱草总黄酮含量较低,从7月开始,总黄酮含量逐渐增加,9月总黄酮含量达到最高,10月又开始下降,其它月份的变化规律还有待于进一步研究。