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不同药物对咪达唑仑在大鼠体内的代谢 细胞色素p450（cyp）是最重要的药物代谢酶之一，分布于肝脏、胆囊和其他器官。这是药物在体内代谢的重要酶系统。现代研究表明,CYP3A占肝脏及肠道中CYP总含量的50%以上,在外源性物质代谢,尤其是药物代谢中起着重要作用。CYP3A亦参与一些重要的内源性物质的代谢,约有60%以上的药物由有CYP3A参与催化代谢,因此了解药物对CYP3A酶活性的影响,对评估药物间的相互作用有着十分深远的意义。目前,选用咪达唑仑作为探针并对其及代谢产物-1′-羟基咪达唑仑进行检测(咪达唑仑在人体经由CYP3A4酶代谢,在大鼠体内经由CYP3A1/2酶代谢),进而评价药物对CYP3A酶的影响,这种方法已经在国内外广泛得到认同。本文以大鼠为实验对象,考察五味子甲素对咪达唑仑研究五味子甲素对CYP3A酶的影响,从而探讨其在药物相互作用中的作用。 1 材料和方法 1.1 动物合格号 Wistar雄性大鼠40只,体重(250±30) g,由湖北省实验动物研究中心提供,动物合格证号为:$CXK(鄂)2008-0005。 1.2 药品、药品与试剂 咪达唑仑(MDZ)对照品:上海现代制药有限公司赠送,纯度98%;1′-羟基咪达唑仑(1′-OH-MDZ)对照品:德国Dr. Margarete Fischer-Bosch临床药理研究所Ulrich Klotz教授赠送;地西泮(DZP)对照品:中国药品生物制品检定所,批号230-9601;五味子甲素(SchA):购自上海融禾医药科技发展公司,相对分子质量为 416.51,纯度 99.25%,批号080705;酮康唑(TKZ)原料药:西安杨森制药有限公司赠送;甲醇(色谱醇);磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸、三乙胺均为市售分析纯;蒸馏水经重蒸馏处理。分析所用其他试剂均为色谱纯。Agilent 1100 高效液相色谱仪(包括G1311A型四元泵,G1313A型自动进样器,G1316A型柱温箱,G1314A型紫外检测器,Agilent化学工作站);Himac CR21G高速冷冻离心机(日本日立)。 1.3 大鼠与米苏血酸对动脉血的分离 40只雄性大鼠于实验中心动物房适应性喂养一周后,随机分为5组(阴性对照组,五味子甲素低、中、高剂量组和阳性对照组)。五味子甲素低、中、高剂量分别每日灌胃给予五味子甲素8、16、32 mg/kg,阳性对照组灌胃给予酮康唑 75 mg/kg,阴性对照组给予同体积蒸馏水。连续给药 2 d 后,第2天晚上禁食 24 h,于实验前第3次灌胃。大鼠经2%乌拉坦腹腔注射麻醉,十二指肠给予咪达唑仑(10 mg/kg)后,分别于0、2、5、10、20、30、60、90、120、180 min 通过采腹股沟动脉血,置于肝素抗凝管内,分离血浆于-40 ℃ 冷藏。采血 30 min 后经十二指肠补充 3 mL 糖盐水(10%葡萄糖:生理盐水=3∶7)。 1.4 有机相hplc的制备 取各时间点采集的血浆 250 μL,加入内标溶液 10 μL (2 μg/L 地西泮),碳酸盐缓冲液(pH 10.2)200 μL,充分混匀后加入萃取液(正己烷∶二氯甲烷=7∶3)5 mL,涡旋混合 5 min,3000 r/min 离心 10 min,取出上层有机相 4.5 mL,于 40 ℃ 水浴中氮气吹干,残留物以 250 μL 流动相溶解,取 50 μL 进行HPLC分析。 1.5 醇-kh2po4缓冲液ld50 色谱柱:Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-甲醇-KH2PO4缓冲液(0.02 mol/L,0.1%三乙胺 pH 3.70)(20∶42∶38);紫外检测波长:230 nm;流速:1 mL/min;柱温:40 ℃。在该色谱条件下,1′-OH MDZ、MDZ和DZP的保留时间分别约为 7.0、8.5、11.2 min,相互分离良好(R1.5)。 1.6 血药浓度动力学参数 采用DAS 2.0药代动力学计算软件分析各组大鼠血药浓度随时间的变化,计算其动力学参数,采用SPSS 10.0 统计分析各组间差异,P0.05 为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 大鼠血浆中1-羟基咪达唑仑浓度检测结果见表1 表1显示服用不同药物后,大鼠血浆咪达唑仑浓度-时间变化趋势。如表1所示,口服SchA或酮康唑组大鼠血浆咪达唑仑浓度均高于阴性对照组。除2、180 min 时,酮康唑组大鼠血浆浓度显著高于阴性对照组(P0.05);除2、5 min 时,SchA 32 mg/kg 组大鼠血浆浓度亦显著高于阴性对照组(P0.05),它们占了 77.8%的时间。结果亦表明,SchA可剂量依赖性升高血浆咪达唑仑浓度。 服用不同药物后,大鼠血浆1′-羟基咪达唑仑浓度-