五脉绿绒蒿对小鼠实验性肝损伤的干预性研究.docxVIP

五脉绿绒蒿对小鼠实验性肝损伤的干预性研究 五脉苦艾酒是罂粟科植物，分布在中国西藏、陕西、甘肃、青海、四川等地。干燥的整药是传统的西藏药物。具有清热解毒、镇痛、消炎利尿的功效。配药具有镇痛、息风和哮喘、肝气、肺炎、肺结核、溃疡、婴儿缺勤、咳嗽、哮喘等功效。本实验研究五脉绿绒蒿对小鼠血清转氨酶含量及对醋氨酚中毒的小鼠生存率的影响,探讨五脉绿绒蒿的肝保护作用。 1 材料和方法 1.1 氯化碳试剂 1.1.1动物 昆明种小白鼠雌雄各半,体重16～20g(由兰州生物制品厂提供) 1.1.2主要药品和试剂 醇提取的五脉绿绒蒿浸膏;四氯化碳试剂(分析纯,用花生油配制成含CCl40.12%的试剂,由广东西陇化工厂生产);食用鲁花花生油;吐温80;谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂盒(由南京建成生物工程研究所提供)。 1.1.3主要仪器和设备721分光光度计;高速冷冻离心机;匀浆机;低温冰箱;电热恒温水浴锅等。 1.2 对小鼠的处理及血清活性测定 1.2.1五脉绿绒蒿药物的提取 将该药粉碎称取1kg加8L食用酒精回馏煮2h,滤出提取液,再加8L的食用酒精重复3次合并提取液并浓缩(回收酒精)在60℃的烘箱里烘干,实验时用花生油:吐温80∶水为1∶1∶8配制生药:浓度为0.47g/ml、0.18g/ml、0.06g/ml。 1.2.2对急性肝损伤小鼠的处理 将50只小鼠在实验室饲养2d后,按体重随机分为空白对照组、CCl4模型组、低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组,每组l0只,让小鼠自由摄取常规颗粒状饲料和自来水。空白对照组不做任何处理,CCl4模型组用药物助溶剂(花生油∶吐温80∶水为l∶l∶8)以10ml/kg剂量灌胃7d,药物组高、中、低三个剂量组分别按6.4g/kg、2.1g/kg、0.75g/kg体重灌胃给药7d,末次给药后2h,除空白对照组的小鼠外,其它四组均按以10ml/kg的剂量按体重一次性腹腔注射0.12%CC14花生油溶剂,禁食不禁水,20h后以眼球摘除法取血,分离血清。 1.2.3对醋氨酚中毒小鼠的处理 小白鼠40只,随机分为4组,对照组,高、中、低剂量组,每组10只,连续灌胃给药5d,于末次给药0.5h后,所有均腹腔注射醋氨酚400mg/kg,观察记录20h内小白鼠的死亡情况。 1.2.4血清样处理 在3500r/min离心15min,取上清液低温保存。 1.2.5ALT活性测定 参照改良赖氏法测定血清中的ALT能与丙氨酸和a-酮戊二酸反应生成丙酮酸及谷氨酸,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙在碱性液中显棕红色,在505nm处有最大吸收值。先用丙酮酸标准液作一标准曲线,然后测定样品的吸光度,查阅标准曲线,并且乘以血清稀释倍数,计算ALT的活力。 1.2.6AST活性测定 参照改良赖氏法测定,血清中的AST能与Asp和a-酮戊二酸反应生成草酰乙酸和谷氨酸,前者与2,4-二硝基苯肼生成的2,4-二硝基苯腙在碱性液中显棕红色,在505nm处有最大吸收值,同上法计算AST的活力。 1.2.6数据处理 所有实验结果用Xˉˉˉ±SEXˉ±SE表示采用t检验。 2 结果 2.1 对血清alt和ast活性的影响 从上表可看出,CC14肝损伤模型组小鼠血清ALT和AST的活性明显高于空白对照组;与模型组比较,药物组小鼠血清ALT和AST的活性明显降低,且中、低剂量的效果较好。 2.2 醋氨酚中毒大鼠的死亡率：结果如表2所示 结果显示:对照组致死率达100%,而给药组随着剂量的增加生存率呈逐渐升高的趋势,复方枸杞能提高醋氨酚中毒的小鼠生存率。 3 cc14的病理生理研究 本实验表明CC14对小鼠肝组织有损伤作用,表现在血清中ALT、AST的含量比空白对照组的有显著性的增高。CC14是一种典型的肝脏毒物,经肝脏微粒体细胞色素P-450激活后,发生均裂产生自由基(CC13)。一方面CC13可以攻击细胞膜上的磷脂分子,引起脂质过氧化,并与膜蛋白结合,破坏了膜的结构和功能;另一方面CC14抑制内质网上的钙离子泵,使钙离子升高,从而激活肝细胞膜上的磷酸化酶,引起脂质过氧化,导致肝细胞膜损伤。当肝细胞受损时,由于肝细胞内的转氨酶的浓度比血清中的高,胞浆内的ALT和AST因浓度差释放入血,造成高血清ALT和AST,故血清中的ALT和AST的含量是反映肝受损的敏感指标,也能反映肝细胞损伤的程度。CC14可引起化学性肝损伤,导致肝细胞变性、坏死、间质细胞浸润,也能引起肝纤维化,肝纤维化又是大多数慢性肝病共有的病理特征,是进一步向肝硬化发展的主要中间环节。肝纤维化的防治是当今肝病治疗的难点之一,也是国际上研究的热点。目前治疗肝病缺乏理想药物,国外对晚期肝硬化唯一有效的方法是肝移植,即使在发达国家,由于可利用的捐献器官少以及潜在接受