药学微生物（第三版） 课件 1-2-2 实训 酵母菌、霉菌的形态观察及大小的测定.pptx

实训 酵母菌、霉菌的形态观察及大小测定 123（一）实训目的掌握观察酵母菌和霉菌形态的基本方法；观察酵母菌和霉菌的形态特征；学习使用显微测微尺测量微生物大小。 （二）实训原理 美蓝是一种无毒性的染料，酵母菌活细胞不着色，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，通过美蓝染液水浸片可以观察酵母菌的形态和出芽生殖方式，以及区分酵母菌的死细胞和活细胞。 测量微生物细胞大小可用显微镜测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，计算出细胞的实际大小。 （三）材料和用具啤酒酵母、大肠杆菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌；0.1%的吕氏美蓝染色液、乳酸石炭酸棉蓝染色液；显微镜、玻璃纸、无菌载玻片、无菌盖玻片、无菌平皿、接种环、镊子、解剖针、酒精灯、无菌培养皿、U形玻棒、恒温培养箱、超净工作台等。 （四）操作步骤1．真菌的形态观察 （1）酵母菌的形态观察 在载玻片中央加1滴0.1%吕氏美蓝染色液，按无菌操作挑取培养48h的啤酒酵母少许，放在美蓝溶液中混匀，用镊子夹一片盖玻片，盖于菌液上，注意不要产生气泡。 将制好的片子置于低倍镜下观察，然后换高倍镜观察，主要观察酵母菌的大小、形状及出芽情况，并区分死活酵母菌。 制片观察---在载玻片的中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染液，用解剖针挑取霉菌菌落边缘少量带有孢子的菌丝，放入载玻片上的染液中，小心将菌丝散开，盖上盖玻片，注意避免产生气泡，置于显微镜下由低倍镜到高倍镜进行观察。（2）霉菌的形态观察 霉菌的载片培养观察---在灭菌的平皿中放入一张吸有20%甘油的无菌滤纸，然后在其上放一个无菌的U形玻棒，放一片无菌的载玻片于U形玻棒上，在载玻片上加一滴已灭菌并融化的沙保琼脂培养基，用接种环沾取各种霉菌的孢子少许，点种于载玻片上已凝固的培养基上，然后盖上无菌盖玻片，盖好培养皿盖，放入25℃～30℃的培养箱中培养2～3天。取出培养好的载玻片，擦干载玻片的背部，置于显微镜下由低倍镜到高倍镜进行观察。（2）霉菌的形态观察 玻璃纸培养观察---向霉菌的斜面试管中加入5ml无菌水，制成孢子悬液，将已灭菌的玻璃纸平铺在沙保培养基平板上，贴紧，吸取0.2ml孢子悬液均匀地涂布于玻璃纸表面，盖好培养皿盖，放入25℃～30℃的培养箱中培养48h；揭开皿盖，剪取一小块长有菌丝的玻璃纸，贴在载玻片上，置于显微镜下观察。（3）菌落的形态观察 认真观察酵母菌和各种霉菌的菌落大小、颜色、形状等特征。 2．真菌大小的测定（1）放置目镜测微尺 （2）放置镜台测微尺 （3）校正目镜测微尺 先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央调焦，看清镜台测微尺刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度线和镜台测微尺的刻度线平行，利用移动器，使两个测微尺在某一区域内两刻度线完全重合，分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺各自的格数。 （4）计算 已知镜台测微尺每格长10μm，根据下列公式即可计算出在不同放大倍数下，目镜测微尺每格代表的实际长度。 两重合线间镜台测微尺格数 目镜测微尺每格长度（μm）= 两重合线间目镜测微尺格数×10 （5）菌体大小的测定目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上菌体染色制片，校正焦距使菌体清晰，转动目镜测微尺（或转动染色标本），测出待测菌的长和宽各占几小格，将测得的格数乘以目镜测微尺每小格所代表的长度，即可换算出此单个菌体的大小值，在同一涂片上需测定10至20个菌体，求出其平均值，才能代表该菌的大小。一般是用对数生长期的菌体来进行测定。（6）测定完毕 及时清场等。 （五）实训结果 填写记录等（六）思考题比较显微镜下细菌与霉菌形态上的异同？为什么更换不同放大倍数目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测尺校正？在不改变目镜和目镜测微尺，改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同，为什么？