第九章-PCR技术及其在医学上的应用.pptVIP

第九章 ;The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1993 ;一、PCR基本原理;B;B;Taq聚合酶的性能 模板DNA的拷贝数 底物dNTP浓度 其他多种因素;二、PCR技术的特点;第二节 PCR系统的组成及PCR最适条件;一、耐热DNA聚合酶;Taq DNA聚合酶的种类;TA克隆定义 ;TA克隆方法(一步PCR克隆);二、寡核苷酸引物;PCR反应引物的常用浓度范围;三、dNTP;四、PCR反应缓冲液;五、模板DNA;六、PCR循环数;七、易发生的问题及解决方法;假阴性;假阳性;PCR产物呈片状;非特异性扩增;第三节 PCR技术的发展;TA克隆定义 ;TA克隆方法(一步PCR克隆);PCR克隆技术 PCR直接测序技术 定量PCR PCR体外定点突变 PCR与突变的分子水平分析 修饰PCR 不对称PCR 反转录PCR 通用引物PCR 套式PCR;第四节 PCR技术在医学上的应用;一、感染性疾病病原体的诊断和研究;二、遗传病相关基因的检测;巴氏水肿胎儿综合征;巴氏水肿胎儿的产前诊断;镰形细胞贫血;杜氏营养不良症（Duchenne muscular dystrophy, DMD）;甲型血友病;甲型血友病;胎儿性别鉴定;1990年确定决定人类性别的基因位于Y染色体短臂的1A1上，即SRY基因（sex-determining region of the Y），染色体上如缺SRY，即发展成女性。 设计扩增人SRF基因和X、Y同源序列的2对引物进行PCR ;三、恶性肿瘤的诊断和研究;1. 恶性肿瘤分子标记的检测及肿瘤残留细胞的监测;1. 恶性肿瘤分子标记的检测及肿瘤残留细胞的监测;以往检测缺失方法：较大缺失在显微镜下分析；微小缺失用印迹杂交 PCR法检测：简单 引物设计方法：①小缺失，设计1对引物分别与缺失两侧的序列互补；②大缺失，在缺失区内设计1对 PCR检测缺失： ①小缺失样品，扩增片段长度变短；②大缺失样品，无靶DNAPCR扩增产物 PCR检测突变方法：PCR-SSCP、引物竞争PCR和PCR直接测序法 ;2. 癌基因、抗癌基因缺失与点突变的研究;3. 肿瘤相关病毒基因的研究;四、法医学研究;五、在骨髓移植配型中的作用;本章思考题第九章 ;The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1993 ;一、PCR基本原理;B;B;Taq聚合酶的性能 模板DNA的拷贝数 底物dNTP浓度 其他多种因素;二、PCR技术的特点;第二节 PCR系统的组成及PCR最适条件;一、耐热DNA聚合酶;Taq DNA聚合酶的种类;TA克隆定义 ;TA克隆方法(一步PCR克隆);二、寡核苷酸引物;PCR反应引物的常用浓度范围;三、dNTP;四、PCR反应缓冲液;五、模板DNA;六、PCR循环数;七、易发生的问题及解决方法;假阴性;假阳性;PCR产物呈片状;非特异性扩增;第三节 PCR技术的发展;TA克隆定义 ;TA克隆方法(一步PCR克隆);PCR克隆技术 PCR直接测序技术 定量PCR PCR体外定点突变 PCR与突变的分子水平分析 修饰PCR 不对称PCR 反转录PCR 通用引物PCR 套式PCR;第四节 PCR技术在医学上的应用;一、感染性疾病病原体的诊断和研究;二、遗传病相关基因的检测;巴氏水肿胎儿综合征;巴氏水肿胎儿的产前诊断;镰形细胞贫血;杜氏营养不良症（Duchenne muscular dystrophy, DMD）;甲型血友病;甲型血友病;胎儿性别鉴定;1990年确定决定人类性别的基因位于Y染色体短臂的1A1上，即SRY基因（sex-determining region of the Y），染色体上如缺SRY，即发展成女性。 设计扩增人SRF基因和X、Y同源序列的2对引物进行PCR ;三、恶性肿瘤的诊断和研究;1. 恶性肿瘤分子标记的检测及肿瘤残留细胞的监测;1. 恶性肿瘤分子标记的检测及肿瘤残留细胞的监测;以往检测缺失方法：较大缺失在显微镜下分析；微小缺失用印迹杂交 PCR法检测：简单 引物设计方法：①小缺失，设计1对引物分别与缺失两侧的序列互补；②大缺失，在缺失区内设计1对 PCR检测缺失： ①小缺失样品，扩增片段长度变短；②大缺失样品，无靶DNAPCR扩增产物 PCR检测突变方法：PCR-SSCP、引物竞争PCR和PCR直接测序法 ;2. 癌基因、抗癌基因缺失与点突变的研究;3. 肿瘤相关病毒基因的研究;四、法医学研究;五、在骨髓移植配型中的作用;本章思考题