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表达传染性法氏囊病病毒非结构蛋白VP5蛋白的DF-1细胞岛的构建的中期报告 尊敬的审核专家，下面是表达传染性法氏囊病病毒非结构蛋白VP5蛋白的DF-1细胞岛的构建的中期报告： I. 引言 传染性法氏囊病病毒（IBDV）是一种会感染鸡类、野鸟和鹌鹑等鸟类的高传染性疾病，引起了禽业生产的极大损失。该病毒的非结构蛋白VP5（NS3）在病毒感染和复制中起重要作用，因此对其进行研究有助于防控该病毒的传播。本研究旨在构建一个稳定表达IBDV VP5蛋白的DF-1细胞岛用于后续研究。 II. 材料和方法 1. 质粒构建 使用PCR扩增IBDV VP5基因，并插入至pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro质粒中，重组质粒命名为pCDH-VP5。 2. 细胞培养 使用DMEM培养液和10% FBS培养DF-1细胞，分别在25cm2培养瓶和96孔板中培养。 3. 细胞转染 将pCDH-VP5质粒构建成的包装体（psPAX2和pMD2.G）与Lipofectamine 2000（Invitrogen）混合，将混合物与DF-1细胞转染36小时。 4. 筛选和扩增稳定细胞岛 使用puromycin对转染细胞进行筛选，获得稳定表达VP5蛋白的DF-1细胞岛，经过多代扩增并鉴定稳定性。 III. 结果 1. 成功构建了含IBDV VP5基因的pCDH-VP5质粒。 2. 成功转染了DF-1细胞，并经过筛选获得稳定表达VP5蛋白的细胞岛。 3. 成功扩增了稳定细胞岛，并对其进行了鉴定，证明其稳定性较好。 IV. 讨论和展望 本研究成功构建了表达IBDV VP5蛋白的DF-1细胞岛，并证明其稳定性较好。下一步的研究计划将利用该细胞岛进一步研究VP5蛋白在IBDV感染和复制过程中的作用和机制。