不同虫源和致害性褐飞虱种群共生菌数量动态及其对氨基酸转移酶活性的影响.docxVIP

不同虫源和致害性褐飞虱种群共生菌数量动态及其对氨基酸转移酶活性的影响 黄褐色门内虫是中国和东南亚许多水稻生产区最重要的害虫之一。我国每年因此虫危害的直接稻谷损失为10～15亿公斤左右,特大发生的1991年虽经全力防治,全国的实际稻谷损失仍达25亿公斤,直接经济损失达50亿元。培育和推广抗性品种是综合治理褐飞虱的优先策略,并已在水稻生产上发挥了巨大作用。但在20世纪70年代初,由于虫源地国家(越南等)大面积连续种植抗性水稻品种IR26,导致褐飞虱对抗性品种的致害性发生变化,产生了新的“生物型”。我国主要稻区褐飞虱种群的致害性也于20世纪80年代末自南而北相继发生了改变,使得生产上推广的抗性品种抗性丧失,使用寿命缩短。褐飞虱种群致害性的变异严重阻碍了我国水稻抗性品种的培育和推广,已成为该虫有效防治的主要难题。褐飞虱体内含有大量的类酵母共生菌,属于子囊菌亚门(Ascomycotina)、核菌纲(Pyrenomycetes)的Candida属,聚集在腹部脂肪体细胞中营出芽生殖,并通过卵母细胞以垂直传递的方式直接传给子代。高温、抗生素、印楝素、寄生物和杀虫剂等均能显著抑制共生菌的数量,阻碍褐飞虱正常的生长发育。但抗性水稻品种对褐飞虱共生菌的影响与共生菌对褐飞虱致害性变异的作用的相互关系等未见报道。为此, 我们于1997～1999年对褐飞虱致害性及其与体内共生菌的关系进行了初步研究,为褐飞虱致害性变异的合理解释、抗性品种的选育和合理布局以及有效延长现有抗性品种使用寿命等提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 水稻品种tren种类 不同稻区的褐飞虱虫源分别于1997年5～7月采自广西的南宁市、浙江的杭州市和龙游县。不同致害性褐飞虱种群采自国际水稻研究所(IRRI)长期用感虫水稻品种TN1和含不同抗性基因的抗虫水稻品种Mudgo(Bph1)、ASD7(bph2)饲养的室内种群,分别为生物型Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。所有褐飞虱虫源在TN1上繁殖1代后供试验用。感虫水稻品种TN1和抗虫品种IR26、Mudgo和ASD7分批分期播种,2叶期移栽到水泥槽,分蘖拔节期移入塑料盆钵中备用。 1.2 方法 1.2.1 抗性品种的致害性及成活率指数测定 (1)水稻苗期致害性鉴定:供试品种TN1、IR26、Mudgo、ASD7、IR36和Rathu Heenati(RH)经催芽露白后播在60 cm×40 cm×10 cm的育苗盆内。每品种1行12株苗,重复3次。2叶1心期定苗,每行10株。平均每苗接入6头左右2～3龄若虫。当感虫品种TN1受害达到9级时,逐日记载各品种死苗数,评定受害等级。按IRRI的标准评定褐飞虱对抗性品种的致害性。(2)水稻成株期若虫存活率测定:在3叶期将被鉴定品种单株移栽,60日龄时剪去分蘖留主茎。用100目网罩后,接入10头4～5龄若虫,重复10次。10天后调查存活虫数,计算存活率。以TN1上的存活率为100,计算各抗性品种上的存活指数。以若虫存活指数50为分界线评定褐飞虱的致害性。 1.2.2 共生菌的检测 分别取个体大小均匀、脱皮24 h内的若虫和成虫,按体重比加入0.9%的生理盐水研磨、匀浆,直接吸取少量匀浆液在血细胞计数器上用Olympus双目显微镜(10×40)通过5点取样法观察共生菌的数量并测量大小。参照Chen等的方法计算共生菌数量。 1.2.3 带卵苗的培养 取笼罩的45～60日龄的TN1苗,除去外叶鞘和虫伤株后接入怀卵雌成虫产卵1天。带卵苗在26℃生化培养箱内培养3天后移到35℃生化培养箱处理72 h,12D∶12L。移回26℃生化培养箱内孵化。 1.2.4 固定和覆盖物的覆盖 取清除部分根和基部叶鞘的45～60日龄的TN1、Mudgo和ASD7苗各1株,呈等边三角形放置于盛有适量培养液的小盆钵中,用打有3个孔的塑料片固定。小盆钵用塑料网罩罩住并用黑布覆盖遮光,接入10头3～5龄褐飞虱若虫后移入室温为(26±3)℃的地下室,重复5次。分别于接虫后24 h和48 h检查褐飞虱在不同品种上的定着数,计算各品种上的褐飞虱百分率作为选择性指标。 1.2.5 及时分离及时养殖 在水稻分蘖拔节期,分单株清除部分根和基部叶鞘后放入注有1.5 cm深水稻营养液的试管中,用脱脂棉封口,水稻叶露在试管外。每支试管中接入24 h内孵化的若虫1头,每个处理重复60次。接虫后将试管移入(26±10)℃、12D∶12L的生化培养箱内。每天检查褐飞虱的生长发育情况,适时加营养液和更换稻苗,直至全部羽化。将同一天羽化的雌、雄成虫配对,接入含相应品种稻苗的大试管内交配,每天观察若虫孵化情况,直至全部卵孵化后解剖未孵化的卵。 1.2.6 酶源酶系统的测定 取10头褐飞虱短翅型雌成虫,加入预冷的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)4 mL,匀浆,1 500 r