生物技术免疫学技术.pptxVIP

生物技术---免疫学技术;免疫学技术;免疫学技术--抗原抗体反应;免疫学技术;酶联免疫法（enzyme immunoassay);酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）;双抗体夹心法 1、将已知抗体吸附于载体上 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗原的待检液 4、温育后清洗 5、加入酶标记特异性抗体 6、温育后清洗 7、加入酶作用底物 8、测定颜色反应深浅;竞争法 1、将已知抗体吸附于载体上 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗原的待检液和酶标记的已知抗原液 4、温育后清洗 5、加入酶作用底物 6、测定颜色反应深浅;生物素-亲和素系统（biotin-avidin system） 基本概念 生物素：是一种维生素H，经活化后，可与抗体、抗原、酶以多 配一的方式共价结合，且不影响它们的活性 亲和素：从卵蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，可与酶偶合，以1配多的方式对生物素有很强的亲和力 BAS用于检测的基本方法： BAB法或BRAB法 BA法 ABC法 ;酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）;均相酶免疫测定法 无需“固定在载体上”；无需“温育后清洗” 斑点免疫结合试验 以微孔薄膜为载体，酶免疫反应阳性结果在膜上出现色斑点 胶体金标记较酶标记更为简便 ;猪肉和尿液盐酸克伦特罗的 免疫胶体金法快速检测 ;瘦肉精中毒事件; “瘦肉精”学名为盐酸克伦特罗，医学上又称克喘素，常用于治疗哮喘。 由于盐酸克伦特罗添加于饲料饲喂动物后可明显促进动物生长,提高 瘦肉率, 所以养殖户称其为“瘦肉精”，曾在国内外广泛用于动物饲养 生猪食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，个别会出现腿抽搐，站不 稳，爬坡困难；宰后猪的肌肉特别鲜红，后臀肌肉饱满，肥肉非常薄;瘦肉精介绍; 《食品卫生法》 《食品添加剂卫生管理办法》（GB2760） 《动物性食品中兽药残留最高限量》（农业部公告第235号， 2002年12月24日）规定：禁用药物，动物性食品中不得检出： 瘦肉精、沙丁胺醇、西马特罗等31种 违法者的法律责任：民事赔偿、行政处罚、刑事处罚;盐酸克伦特罗残留检测方法 ;猪肉全程监控中瘦肉精检测方法的选择;免疫胶体金快速检??板的外观图; ;检测原理;灵敏度 肉样或组织样：1ppb(标准前处理)或5ppb（简单前处理） 尿样： 1ppb(标准前处理) 特异性：与沙丁胺醇等苯乙胺类药物没有交叉反应； 准确性：与瘦肉精ELISA试剂盒的检测结果符合率90％ 有效期：半年（冷藏闭光保存）;操作步骤;