杨树单宁合成关键酶基因LARs和ANR的功能分析的中期报告.docxVIP

杨树单宁合成关键酶基因LARs和ANR的功能分析的中期报告 本次实验旨在研究杨树单宁合成关键酶基因LARs和ANR的功能，并给出中期结果汇报。 实验方法： 1. 构建LARs和ANR基因的CRISPR/Cas9编辑载体，转化入杨树愈伤组织中； 2. 筛选出目标基因编辑成功的愈伤组织，进行 PCR 验证； 3. 通过 qRT-PCR 分析目标基因敲除对其它单宁合成相关基因表达的影响； 4. 采用 HPLC-MS/MS 技术检测不同基因敲除杨树愈伤组织中单宁含量的变化。 结果分析： 1. 构建的CRISPR/Cas9编辑载体成功转化入杨树愈伤组织中； 2. 目标基因LARs和ANR成功进行了基因敲除，PCR结果符合预期； 3. qRT-PCR结果表明，敲除单个基因LARs并没有明显地影响其它单宁合成相关基因的表达，而ANR的敲除却导致了多个单宁合成相关基因（如DFR，ANS 和UFGT等）的表达下降； 4. HPLC-MS/MS结果表明，LARs基因敲除和ANR基因敲除均会显著降低杨树愈伤组织的儿茶酸含量，其中ANR基因敲除降低幅度尤为明显，且敲除组织中原花青素和花色苷的积累增加。 结论： 敲除杨树单宁合成关键酶基因LARs和ANR都会降低愈伤组织中儿茶酸的含量，其中ANR的敲除对其它单宁合成相关基因表达影响较大，同时可增加原花青素和花色苷的积累。这表明，LARs和ANR是杨树单宁合成