实验三 细菌的简单染色和革兰氏染色.docVIP

实验三 细菌的简单染色和革兰氏染色 一、目的与要求 1、掌握细菌涂片标本的制备2、掌握革兰氏染色法的步骤和关键点 3、识别细菌革兰氏染色结果 二、实验原理： 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。 为什么要对细菌染色？细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。 简单染色法可用以观察微生物的形状、大小及细胞排列状态，是微生物技术中应用广泛，操作简便的染色法。 革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色，而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。 三、实验器材 1、菌种 牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28 2、仪器 显微镜； 3、材料 载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。 4、染料 草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液； 细菌的简单染色步骤： 涂 涂 片 干 燥 固 定 染 色 水 洗 干 燥 镜 检 细菌的革兰氏染色步骤：涂 片,干 燥,固 定,结晶紫染 色,水 洗,碘液媒染,水 洗,乙醇脱色,水 洗,番红复染,水 洗,干 燥,镜 检. 五、实验关键步骤和注意点： 1、玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。2、挑菌量宜少，涂片宜薄，过厚则不易观察。涂片厚度适当。3、固定温度适当。4、革兰氏染色成败的关键是脱色时间，脱色程度适当。5、染色过程中勿使染色液干涸。 六 实验报告 1.画出你所观察到的形态并标出革兰氏染色结果。 2.思考题： （1）涂片后为什么要进行固定？固定时应注意什么？ （2）革兰氏染色步骤是什么？其中关键步骤是什么？ （3）为什么必须用培养24h的菌体进行革兰氏染色？