平板菌落计数法操作步骤行业资料实验.pdf

平板菌落计数法操作步骤（精） 平板菌落计数法 一、 目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 二、 基本原理 平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞, 取一定 量的稀释液接种到平板上，经过培养，山每个单细胞生长繁殖而形成的肉 眼可见的菌落， 即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统讣菌落数，根据其 稀释倍数和取样接种量 即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不 易完全分散成单个细胞, 所以， 长成的一个单菌落也可能来自样品中的 2~3 或更 多个细胞•因此平板菌落计数的结果往往 偏低•现在常使用菌落形成单位。 该讣数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得 ，而且测定结果易 受多种因 素的影响 ，但是这种讣数方法最大的优点是可以获得活菌的信息 ，所以 被广泛用于生物制 品检验 ，以及食 品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测. 三、 器材 大肠杆菌悬液，LB 琼脂培养基,lmL 、5m L 无菌吸管 ，无菌平皿 ，无菌水 ，无菌 试管 ，试 管架和记号笔等. 四、 操作步骤 1、编号 9 1 0-4 10—5 10—6 6 取无菌平皿 套 ，分别标明为 、 、 各三套 ，另取 支无菌试 管分别标记 10— 1 1 0-2 1 0-3x 10-4 . 1 0 -5 10— 6 为 、 、 、 。 2、稀释 用 ImL 无菌吸管吸取 lmL 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液，精确地放 0.5mL 至 10-1的试管 中，此即为 1 0 倍稀释，将多余 的菌液放回原菌液中。 将 10-1试管充分振荡 、混匀. 另取一支 1 ml 吸管插入 10-1试管 中来回吹吸菌 液三次 ，进 一步将菌体分散、混匀 。动作不要太猛太快 ，吸时插入 ，吹时提出，再 用此吸管吸取 I 0-1 菌液 1 mL, 精确地放 0 。5 mL 至 10-2试管 中，此即为 100 倍稀释，依次类推 ， 3、 取样 1 ml 10—4 10-5 . 10—6 1 mL, 用三支 无菌吸定分别吸取 、 的稀释菌悬液各 对号放入编好号 的无菌平皿 中，每个平皿放 0. 2mL 平板菌落计数法操作步骤( 精) 4 、 倒平板 尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至 4 5 度的 LB 培养基约 15-20ml, 置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀。 5、 培养 倒置于 3 7 度培养箱中培养 4 8 小时， 6、 计数 算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行讣算； 每毫升中菌落形成单位(cf u )= 同一稀释度三次重复的平均菌落数 X 稀释倍数 X5 五、实验报告 1、结果 将培养后菌落讣数结果填入下表： 10-4 10-5 10—6 稀释度 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 Cfu 数/ 平板 每毫升 的 c f U 数 2、思考题 (I ) 为什么溶化后的培养基要冷却至 45°C 左右才能倒平板？ (2) 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪儿个关键？为什么？ (3) 同一种菌液用血球计数板和平板菌落计数法同时计数，所得结果是否一样? 为什么？ (4) 试比较平板菌落计数法和显微镜下直接讣数法的优缺点 。