血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验设计.docVIP

综合性实验 实验报告 实验名称：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 姓　　名： 指导教师： 专　　业： 生物技术 实验班级： 实验时间： 实验地点：实验楼生物化学实验室 成　　绩：_________________________________ 实验目的 掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法。 作出清晰合格的人血清蛋白的电泳图谱。 实验原理 1、带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的方向移动，这种现象称为电泳，采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法称为醋酸纤维薄膜电泳。 影响泳动速度的重要因素：①电场强度E ②溶液的pH ③溶液的离子强度 ④电渗现象 ⑤其他影响因素 血清蛋白的等电点，分子量与泳动度的关系 蛋白质的名称 等电点 分子量 泳动度（cm2／v·s） 清蛋白 4.88 6.9×10? -5.9×10-5 α?－球蛋白 5.06 2.0×105 -5.1×10-5 α?－球蛋白 5.06 3.0×105 －4.1×10-5 β－球蛋白 5.12 0.9~1.5×105 －2.8×10-5 γ－球蛋白 6.85~7.5 1.56~3.0×105 －1.0×10-5 正常人血清蛋白的相对含量： 清蛋白 54.0~73.0％ α?－球蛋白 2.8~5.1％ α?－球蛋白 6.3~10.6％ β－球蛋白 5.2~11.0％ γ－球蛋白 12.5~20.0％ 三、实验仪器与试剂 3.1实验仪器：醋酸纤维薄膜（2×8㎝） 常压电泳仪 点样器 培养皿 粗滤纸 玻璃板 竹镊 白瓷反应板 3.2.实验试剂：巴比妥缓冲液1000ml 染色液300ml 漂洗液2000ml 透明液300ml 实验步骤与方法 ①醋酸薄膜的浸泡（30min左右） ②制作滤纸桥 ③平衡：用平衡装置使三个电泳槽内的缓冲液面处于同一水平 ④点样：在毛面距边界1~1.5cm处点样 ⑤电泳：110V电泳60min ⑥染色 5~10min ⑦漂洗 四次 实验结果 5.1实验结果 醋酸纤维薄膜血清蛋白电泳图谱显示在滤纸条上从点样处开始依次为 γ－球蛋白、 β－球蛋白 、α?－球蛋白 、α?－球蛋白、 清蛋白 5.2注意问题： 1，薄膜本身的质量问题（涂层不均匀等）， 2，点样技术问题， 3，电压电流控制问题， 4，样品本身是否有降解、污染； 5，实验过程其他可能影响结果的问题，如平衡时间、浸泡时间、染脱色透明时间等。。 参考文献 1、王秀奇 秦淑媛 高天慧等 基础生物化学实验（第二版）2011年12月 2、王镜岩 朱圣庚 徐长法等 生物化学（第三版） 2012年5月 2、芦晓红 宁夏医学杂志 维普资讯网 2002