免疫沉淀结合质谱分析筛选相互作用蛋白.docx

具体步骤： 免疫共沉淀〔Co-immunoprecipitation〕 培育 HEK293FT 细胞至 90%集合，将 pCMV-Myc-AP-2β用磷酸钙转染法转入HEK293FT 细胞中。 磷酸钙转染方法: 在转染前一天，对于 100mm 培育皿，每皿用 10m1 不含抗生素的培育液培育细胞。 转染的当天，细胞密度最好到达90-95%，吸掉旧培育液，PBS 漂洗一次，换成l0mL 无血清无抗生素的培育液。 将待转染的外源DNA 同 CaCl2 混合制成CaCl2-DNA 溶液； d、在不断搅拌振荡过程中，逐滴缓缓地参与到 HEPES-磷酸钙溶液中 去，形成一种磷酸钙-DNA 共沉淀； e.