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肠道病毒71型病毒样颗粒的制备、纯化与鉴定的中期报告 肠道病毒71型（Enterovirus 71，EV71）是一种单链正股RNA病毒，在全球范围内广泛分布，是引起幼儿手足口病（HFMD）的主要病原体之一。随着HFMD病例呈逐年增加的趋势，预防、控制EV71感染变得越来越重要。因此，制备、纯化和鉴定EV71样颗粒是进行疫苗研究的必要步骤。本文介绍了EV71病毒样颗粒的制备、纯化和鉴定的中期报告。 制备EV71病毒样颗粒 首先，通过培养EV71肠上皮细胞株（RD细胞）来制备病毒样颗粒。细胞株种植于Dulbecco（DMEM）培养基中，并加入10%胎牛血清（FBS）、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素，培养于37℃的5% CO2气氛下。当细胞密度达到80%时，加入EV71病毒株，并进行20~25℃、56℃两个温度的扩增。培养4~5天后，采集细胞上清液，离心去除细胞碎片和大颗粒物质。 纯化EV71病毒样颗粒 病毒样颗粒纯化主要通过离心、超滤等分离技术实现。首先，进行低速离心，将病毒和细胞残渣分离。接下来，进行高速离心，将病毒分离出来，并进行四次纯化。一次在10%蔗糖溶液中进行，三次在平衡缓冲液中进行。最后，将纯化后的EV71病毒样颗粒在-70℃下储存。 鉴定EV71病毒样颗粒 对制备好的EV71病毒样颗粒进行鉴定主要通过电子显微镜、聚合酶链反应（PCR）等技术实现。首先，采