第四章固定化酶演示文稿.pptVIP

DEAE-Sephadex固定化氨基酰化酶：将DEAE-SephadexA25充分溶胀，用0．5mol/LNa0H和水洗涤后，加入pH7.0—7.5的米曲霉3042粗酶液(水解乙酰—DL-Ala活力为25umol/m1·h)充分混合(1g湿重载体加60ml酶液)后，于低温下搅拌过夜后，吸去上清液，再用蒸馏水和0.15mol/L醋酸钠水溶液洗涤固定化酶，置4℃备用。固定化酶活力回收50-60％，水解乙酰—DL—A1a活力为600-800umol/g·h湿固定化酶。氨基酰化酶也可固定于DEAE—纤维素。 此外，DEAE—纤维素吸附的α—淀粉酶、蔗糖酶已作为商品固定化酶。 当前第62页\共有91页\编于星期三\9点 通过酶蛋白化学修饰来增加蛋白质分子上电荷，能有效的克服吸附法制备的固定化酶在使用过程的解吸。用水溶性乙烯—顺丁烯二酸酐共聚物共价修饰的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶、可以用DEAE—纤维素和DEAE—Sephadex载体有效的固定。这种固定几乎是不可逆的吸附。 　　 　　此外，酶的吸附与解吸还与介质中离子强度、pH、温度、蛋白质浓度及酶和载体的特性相关。pH的变化影响到载体和酶的电荷，从而影响载体对酶的吸附。在等电点两侧(±1-2pH单位)吸附将明显减少，但也有个别例外。盐对吸附的影响较为复杂．在一些特殊事例中、盐可以促进蛋白质的吸附。这就是所谓的盐析吸附。对蛋白质吸附