南瓜热激蛋白相关基因CmHSP70-5的克隆和高温胁迫下的表达分析.docxVIP

南瓜热激蛋白相关基因CmHSP70-5的克隆和高温胁迫下的表达分析 胡艳平;周扬;杨春;廖道龙;朱白婢;王敏;黄文枫;张文;云天海【期刊名称】《《中国蔬菜》》【年（卷），期】2019（000）008【总页数】6页（P28-33）【关键词】南瓜;高温胁迫;CmHSP70-5基因;基因表达【作者】胡艳平;周扬;杨春;廖道龙;朱白婢;王敏;黄文枫;张文;云天海【作者单位】海南省农业科学院蔬菜研究所海南省蔬菜生物学重点实验室海南省瓜菜育种工程技术研究中心海南海口571100;海南大学园艺学院海南海口570228;海南省农业科学院海南海口571100【正文语种】中文海南省具有得天独厚的生态优势和气候条件，蔬菜栽培由来已久，是我国最主要的南菜北运基地。随着人民生活和消费水平的不断提高，迫切要求各种蔬菜作物实现周年生产和供应。但蔬菜作物在生长发育过程中常常会受到各种非生物胁迫的影响，其中高温胁迫是影响其生长发育和产量的重要因子之一。蔬菜作物对于高温胁迫的响应并非完全是被动的，其体内会产生相应的适应机制来降低胁迫造成的危害（韩笑冰等，1997；叶陈亮等，1997），以维持基本的代谢过程，甚至通过开启某些基因或者酶的表达来缓解高温带来的危害（秦俊等，2001；田靖和郭世荣，2012;闫圆圆等，2016）。因此，通过研究蔬菜作物的耐热机理，可以有助于人们培育出耐高温的蔬菜新品种。 植物在进化过程中形成了许多应对高温逆境的机制，包括基础耐热性和获得耐热性。当植物受到高温胁迫时，一些基因被激活，从而导致一些代谢物和蛋白的含量增加，这些基因中有些可能会保护植物免受高温胁迫的伤害，有些可能会激活某些特定基因的表达从而增强植物的耐热性。目前已经克隆的与植物耐热性有关的基因主要分为热激蛋白（HSPs，heatshockproteins）、热激转录因子（HSFs，heatstresstranscriptionfactors）、与膜稳定性、抗氧化和激素相关的基因等。热激蛋白（HSPs）被认为是热胁迫诱导的一类蛋白，其中包括：HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40和smallHSP（sHSP）（方丽平和李进步，2007）。Katiyar-Agarwal等（2003）将拟南芥的hsp101基因导入水稻，发现转基因株系的耐热性有一定程度的提高且产量稳定。将玉米ZmHSP22基因转化到拟南芥中，发现转基因株系生育期缩短，同时耐热性增强（Rhoadsetal.，2005）。在拟南芥中过量表达菊花HSP70基因可以增强植株对高温胁迫的耐受性（Songetal.，2014）。将番茄热激蛋白基因Lehsp100反义敲除后，转反义链的株系和对照相比耐热性下降（Yangetal.，2006）。对海带Sjhsp70基因在温度胁迫下的表达变化分析表明，高温对Sjhsp70的表达量具有显著影响（袁艳敏等，2018）。南瓜起源于中、南美洲，包括30个种，其中有5个栽培种：中国南瓜（Cucurbitamoschata）、美洲南瓜（C.pepo）、印度南瓜（C.maxima）、灰籽南瓜（C.mixta）以及黑籽南瓜（C.ficifolia）。不同南瓜品种的耐热性差异较大，不耐热品种在高温季节及温室栽培下容易受到高温伤害。一般认为，中国南瓜广泛种植于热带和亚热带地区，生长发育的适宜温度一般为18~32°C，具有较好的高温适应性，但温度超过35C时，雄花易变为两性花。海南地处热带边缘，夏季太阳辐射强，平均气温在25C以上，极端最高气温超过38C,高温严重制约着海南南瓜产业的发展。因此，开展南瓜对高温胁迫的机理研究，对于筛选培育出耐热的南瓜品种，丰富海南南瓜品种资源具有深远意义。本试验基于南瓜基因组的数据，从南瓜中分离1个热激蛋白相关基因CmHSP70-5，对其在高温胁迫下的表达进行分析研究，以期为深入探讨南瓜耐热机理提供理论指导。 1材料与方法1.1试验材料及处理于2018年11月选用海南地区广泛种植的蜜本南瓜（Cucurbitamoschata）,将种子播种在装满基质（泥炭土：蛭石=1V：1V）的花盆中，放置在培养箱中生长，待长出3片真叶后，进行37°C和42°C持续高温处理，分别在高温处理后0、3、6、12、24、48h取南瓜幼苗的根、茎、叶，用超纯水清洗，然后用液氮速冻后立即放入-80°C保存以备提取RNA。整个试验均在海南省瓜菜育种工程技术研究中心完成。 RNA提取及反转录采用天根生化科技（北京）有限公司的RNA提取试剂盒（RNAprepPurePlantKit,目录号：DP441）提取南瓜幼苗的RNA，采用宝生物工程（大连）有限公司的反转录试剂盒〔PrimeScriptRTreagentkitwithgDNAEraser（PerfectRealTime）,目录号：D