疾病相关基因的发现及功能研究.pptVIP

第一轮测序图谱 Fig 18 Sequence results of product from first 5’RACE 当前第63页\共有89页\编于星期五\6点 优 点 同其他方法相比较 微量样品：仅需0.2μg总RNA作为起始材料 高通量：可同时分析多组样品 敏感性：高, 可检出低丰度mRNA 实验周期： 短, 约8天即可完成, 便于重复 脚踏实地：步步验证比较 可简单地将DD的特点概括为“3SRV”,即“Simplicity, Sensitivity, Speed, Reproducibility, Versatility” 当前第31页\共有89页\编于星期五\6点 同其他方法相比较 一是假阳性多(约50 %～70 %) 二是得到的有差异cDNA片段短 (约为110～500 bp) 缺 点 当前第32页\共有89页\编于星期五\6点 假阳性的原因 提取总RNA时, 有染色体DNA污染,此DNA作为模板在PCR过程中被扩增 从聚丙烯酰胺胶上挑选有差异条带时,实验组与对照组间信号对比不够显著 在克隆阶段挑选阳性菌落时,未能排除基因克隆中的假阳性 研究中多次使用PCR技术,很难避免实验室环境中的交叉污染 当前第33页\共有89页\编于星期五\6点 解决方法 提取RNA操作严格,得到的RNA 必须经过脱氧