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5种杜鹃幼苗的生理生化特性及耐热机制分析 中国是世界上恢复和分布的杜鹃花植物的中心。虽然有丰富的野生花卉资源，但这些野生资源主要分布在中国西南部的海拔地区。受遗传因素的制约,该属植物喜冷凉、湿润环境,耐热性较差,高温热害是制约其迁地保育及园林应用的主要限制因子。杜鹃花种类繁多、遗传资源丰富,不同种间的生态习性和耐热性存在较大差异。为了探讨杜鹃花属植物的耐热机制及不同种间的适应性差异,近年来部分学者针对杜鹃花属植物开展了高温胁迫实验,筛选出一批与杜鹃花耐热性有关的形态及生理指标。然而,植物耐热性是受多基因控制的数量性状,且受环境条件的复杂性和植物对高温胁迫的适应性等多因子影响,故仅凭个别或少数指标的简单比较难以真实地反映植物耐热性的遗传本质。 主成分分析法可以在不损失或很少损失原有信息的前提下,将原来数量较多且彼此相关的指标转换成新的个数较少且彼此独立的综合指标,并在此基础上计算出供试植物的每个综合指标值及其相应的隶属函数值,经加权求和可得到供试植物的抗逆性综合评价值。近年来,该方法已被应用于大白菜(Brassica pekinensisRupr.)、小麦(Triticum sestivumL.)和水稻(Oryza sativaL.)等农作物和一些绿化植物的抗逆性评价,并取得了较为客观可靠的评价效果,但尚未见有关杜鹃花属植物耐热性鉴定与评价方面的研究报道。 为探索和建立快速、有效的杜鹃花耐热性的鉴定方法,作者对高温胁迫条件下5种杜鹃花属植物实生苗的6个生理生化指标进行了测定和相关性分析,并应用主成分分析和隶属函数法对5种杜鹃的耐热性进行了综合评价,据此建立了最优回归方程,以期为杜鹃花属植物耐热性的鉴定、评价、预测及耐热种质的发掘和遗传改良提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 种子和苗木来源 供试种类有映山红亚属[Subgen.Tsutsusi(G. Don) Pojark.]的白花杜鹃[Rhododendron mucronatum(Blume) G. Don]、马银花亚属(Subgen.AzaleastrumPlanch. ex K. Koch)的毛棉杜鹃(R.moulmainenseHook. f.)、羊踯躅亚属[Subgen.Pentanthera(G. Don) Pojark.]的羊踯躅[R.molle(Blume) G. Don]、常绿杜鹃亚属[Subgen.Hymenanthes(Blume) K. Koch]的红滩杜鹃(R.chihsinianumChun et Fang)和杜鹃亚属(Subgen.RhododendronL.)的红棕杜鹃(R.rubiginosumFranch.),均为江西省·中国科学院庐山植物园内同批播种的4年生实生苗。 2009年4月初,选取大小一致且生长健壮的5种杜鹃的4年生实生苗栽植于高9 cm、上口径11.5 cm、底径8.5 cm的塑料盆中,每盆1株,栽培基质为当地林下的表层腐殖土,土壤中有机质和腐殖质的质量分数分别为10.87%和6.63%,速效氮、速效磷和速效钾的质量浓度分别为266.20、22.17和83.65 mg·kg-1,pH 4.79。供试苗置于常温温室中培养,采用日常养护管理方法,3个月后进行胁迫实验。 1.2 方法 1.2.1 自然气候条件 分别设置22 ℃(对照)、30 ℃(轻度高温胁迫)和38 ℃(重度高温胁迫)3组处理;每组处理设3次重复,每一重复6株苗。实验在空气相对湿度80%、光照时间12 h·d-1、光照强度120 μmol·m-2·s-1的人工气候箱中进行。盆底设置托盘(水深1.0～1.5 cm)补充基质水分。胁迫处理6 d后,随机采集当年生功能叶(成熟叶),去除中脉;一部分直接用于丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)和脯氨酸(Pro)含量的测定;另一部分置于-70 ℃保存,用于超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定。 1.2.2 抗氧化酶mda、sod、cat、apx活性测定 MDA含量的测定参照文献的方法并略加改进。称取0.5 g新鲜叶片,加入体积分数20%三氯乙酸与体积分数0.5%硫代巴比妥酸的等体积混合液5 mL及少许石英砂,研磨至匀浆;沸水浴中保温30 min后,置于冰浴中迅速冷却;用3-18K离心机(德国Sigma公司生产)于10 000g离心10 min;取上清液,采用UV-3100PC扫描式紫外可见光分光光度计(上海美谱达公司生产)测定450、532和600 nm处的吸光值,根据下列公式计算样品中的MDA含量:MDA含量=6.45×(A532-A600)-0.56×A450。 采用文献的方法测定H2O2含量。于波长390 nm处测定吸光值,并根据标准曲线方程y=70.185x-0.66