生化实验理论(1)(1)(1)(1).pdfVIP

1.比色法：利用比较溶液颜色的深浅来测知溶液中所含有色物质浓度的方法。 可见光分光光度法：用可见光（400-760nm）测定有色物质含量的方法。 2.分光光度法 紫外光分光光度法：用紫外光（200-400nm）测定无色物质含量的方法。 3.单色光：单波长的光 4.光的色散：混合光分解成单色光的现象。 5.互补色：两种适当颜色的光按一定强度比例混合可以形成白光，这两种光成为互补色 光。 6.吸光度E：溶液对光线的吸收程度。 7.标准曲线法：标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下， 等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线 8.朗伯比尔定律：光吸收程度A和吸收层厚度L、吸收物浓度C之间的关系。 A=K C L K为吸光系数 × × K=A/C L × 9.电泳:带电质点在电场力的作用下发生定向移动的现象。 10.电泳技术：利用电泳现象进行物质分离、纯化及鉴定的技术。 11.迁移率M：指带电质点在单位电场强度下的电泳速度。 （公式P31） 12.离心技术：根据不同物质的沉降系数、密度不同，在同一转速、同一部位受到的离心力不同 而出现不同的沉降速度，从而达到浓缩、分离纯化的目的。 低速6000rpm 中速6000-15000rpm 高速15000rpm 实验一：双缩脲法测定蛋白质含量 ◎蛋白质的双缩脲反应：蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，此 反应和双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用生成紫红色反应相似，故称双缩脲反应。 -3 -3 ◎蛋白质浓度（g/L）=蛋白质含量（mg）×10 /0.1mL×10 ◎人正常浓度60-80g/L 实验三：紫外光分光光度法测定蛋白质含量 ◎根据蛋白质中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸在280nm具有吸收峰进行定量，将样 品直接放到紫外管分光光度计上进行测定。 ◎LowryKalcker 公式：蛋白质浓度（mg/mL）=(1.45A -0.74 )×500 280 A260 实验六：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 ◎蛋白质为两性电解质，其氨基酸残基上含有可解离的酸性或碱性基团，在pH不同的溶液中可 进行酸性或碱性电离。 ◎等电点：在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，所带净电荷 为零，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。 ◎血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6 以醋酸纤维素为支持介质，电泳分离后经染色处 理可将血清蛋白质分成五条主要条带，从正极起依次为 白蛋白,α—球蛋白、α —球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白 1 2 实验九：氨基酸薄层分析 ◎吸附薄层层析是将吸附剂等材料均匀地铺在玻璃板或其他薄板上，形成薄层然后在上面进行层 析的方法。吸附剂-硅胶，展开剂-正丁醇+冰乙酸+水 ◎染色：茚三酮，氨基酸显色反应 ◎R=原点到斑点距离/原点到展开剂前沿距离 f 实验十四：碱性磷酸酶ALP 的动力学分析 ◎底物磷酸苯二钠ALP水解生成游离酚+磷酸盐酚在碱性环境与4-氨基安替◎ 比林作用、经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物比色测定 ◎酶本质是蛋白质 ◎酶促动力学是研究pH、温度、底物浓度、抑制剂等对酶活性的影响。 ◎人体内大多数酶最适pH为6.0-8.0，胃蛋白酶1.5-2.0，ALP为8.6-10.0. ◎酶活性单位：100ml酶液在37℃保温下15min产生一个酚者。 ◎酶抑制剂：凡降低酶活性的物质。分为可逆性和不可逆性可逆性又分为竞争性和非竞争性。 ◎底物浓度[S]与酶促反应速度V关系【米氏方程】： V=V ◎[S]/(K +[S]) K 为米氏常数 m m m ◎双倒数法 Linew