吲哚乙酸氧化酶活性测定.docxVIP

吲哚乙酸氧化酶活性的测定一实验原理 吲哚乙酸氧化酶能调节植物体内IAA的水平，从而影响植物的生长。生长素分布在生长旺盛的部位，IAA氧化酶分布在生长不旺盛的部位。IAA氧化酶是一种含Fe的血红蛋白，以二价锰离子和一元酚为辅因子。降解产物包括CO2和3-亚甲基羟吲哚等。酶活力的大小可以用破坏IAA的速率表示，即：IAA氧化酶活力=IAA减少的速率。在无机酸存在下，IAA能与FeCl3作用，生成红色的螯合物。该物质在530nm处有最大光吸收峰。 二实验材料与试剂 1、材料：玉米幼苗的胚根、胚芽。 2、试剂：20mmol/L的磷酸缓冲液（pH6.0）；1mmol/L的2、4-二氯酚； 1mmol/L的氯化锰；200ug/mL的吲I噪乙酸（少量乙醇溶解后定容）； 试剂B：0.5mol/LFeCl3-35%过氯酸（V:V=1:50）,（使用前混合，避光保存）。 三实验步骤 1、提取IAA氧化酶：称取0.3g玉米幼苗的胚根、胚芽，加入预冷的磷酸缓冲液（pH6.0）1.5mL，冰浴研磨，4000rpm离心10分钟，取上清液，即为粗酶液。 2、IAA氧化酶与IAA的反应: 试管号 MnCl2 2、4-二氯酚 IAA(200ug/mL) 酶液 磷酸缓冲液（pH6.0） 实验 0.5mL 0.5mL 0.5mL 1mL 2.5mL 对照 0.5mL 0.5mL 0.5mL 3.5mL 两管分别混匀，2