Tm值分析和总结.docxVIP

Tm 值就是DNA 熔解温度，指把 DNA 的双螺旋结构降解一半时的温度。不同序列的 DNA， Tm 值不同。DNA 中 G－C 含量越高，Tm 值越高，成正比关系。Tm 是PCR 引物设计中一个非常重要的参数.是指引物与模板之间精确互补并且在模板过量的情况下有50% 的引物 计算方法核酸Tm 值（解链温度）计算评价标准是核酸所吸收的光线量达到其所增加吸收260nm 光线的量的两倍达到的温度， 当核酸达到Tm 值时，其 260nm 吸收量可增加百分之四十（紫外吸收量随解体程度而增加，直至完全解体。长度为 25mer 以下的引物，Tm 计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm 计算方法 核酸Tm 值（解链温度）计算 评价标准是核酸所吸收的光线量达到其所增加吸收260nm 光线的量的两倍达到的温度， 当核酸达到Tm 值时，其 260nm 吸收量可增加百分之四十（紫外吸收量随解体程度而增加，直至完全解体。 长度为 25mer 以下的引物，Tm 计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸，Tm 计算公式为： Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) –600/size 公式中，Size = 引物长度影响 Tm 值的因素： ①DNA 碱基组成：C-G 含量越多，Tm 值越高；A-T 含量越多，Tm 值越低。 ②溶液的离子强度：在低离子强度中，Tm 较低，而且解链的温度范围较宽；在高离子强度中，Tm 值较高，解链的温度范围较窄。 ③PH 值：溶液的PH 值在 5~9 范围内，Tm 值变化不明显，当PH11 或 PH4 时，Tm 值变化明显。 ④变性剂：各种变性剂主要是干扰碱基堆积力和氢键的形成而降低Tm 值。 ⑤DNA 双链本身的长度。