PCR实验室设计行业资料实验.docxVIP

在超净台内进行。2.4扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩门牌或不同的地面颜色等)，以避免各个不同实验区域设备物品、试来自样本制备区) 在超净台内进行。2.4扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩 门牌或不同的地面颜色等)，以避免各个不同实验区域设备物品、试 来自样本制备区)的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区） 力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩 PCR 扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标 本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区.为避免交叉污染， 进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标 本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。PCR 实验室平面布置示意 图如图 1 所示 图 1 传递窗 传递窗 扩增反应混 合物配制和 扩增区 缓 冲 区 试剂贮存和 准备区 扩增产物 分析区 标本制备区 2 实验室空调通风系统设计及压力控制 PCR 实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可 能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保 证各实验区的压力要求。 2.1试剂贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制 备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区， 不得经过其他区域.试剂原 材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂. 对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。 2。2 标本制备区 该区域主要进行的操作为样本的保存、 核酸（ RNA 、DNA) 提取、贮存及其加入 例以保证各实验区的压力要求。2.1试剂贮存和准备区该实验区主的管理（1）严格控制进出实验室的人员.与实验无关的人员不得随物的污染 例以保证各实验区的压力要求。2.1试剂贮存和准备区该实验区主 的管理（1）严格控制进出实验室的人员.与实验无关的人员不得随 物的污染;天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染 首先应是预防，而不是排除。3.1工作区域的严格划分（1）各个 本区的压力梯度要求为： 相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气 溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免 在本区内不必要的走动。 2.3扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为 DNA 扩增。此外，已制备的 DNA 模板 （来自样本制 备区)的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也 可在本区内进行. 本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避 免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等 应在超净台内进行。 2.4扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定. 本区是最主要的扩增产物污染来源， 因此对本区的压力梯度的要求为： 相对于邻 近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。 3 污染的预防与控制 PCR 实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种 污染类型： 扩增产物的污染;天然基因组 DNA 的污染；试剂的污染以及标本间的 污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结 果必须作废，需重新进行实验.所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但 耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染， 首先应是预防，而不是排除。 3.1工作区域的严格划分 （ 1）各个实验区域设置合理； （2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等)，以避 免各个不同实验区域设备物品、 试剂等发生混淆。 3.2 合理的系统设置 （ 1 ）合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统； （2)严格的气流压力控制， 保证不同的实验区内不同的压力要求。 3。3 规范的操作 的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩剂等发生混淆。3.2合理的系统设置（1）合理的空调通风系统设（ 的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应 来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染， 力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩 剂等发生混淆。3.2合理的系统设置（1）合理的空调通风系统设 (2 ）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一 次性帽子也是一个有效地防止污染