植物生物技术3_实验二：愈伤组织的诱导及形态观察-华中农业大学课件.pdf

植物生物技术实验 实验二 植物愈伤组织的诱导及观察 华中农业大学植科院 实验二 一实验目的 ·掌握植物体细胞胚胎发生的基本理论 ·了解植物愈伤组织在诱导和分化过程中的形态 学、细胞学特征 ·巩固植物离体培养和无菌操作的步骤 实验二 二实验原理 ·植物细胞全能性：脱分化-——再分化 Time after induction 0h 6h 24h 48h NEC EC GE TE CE G Transition from Dedifferentiation of cotton cells NEC to EC Embryo development 实验二 愈伤组织形态及细胞学特征： √胚性愈伤：呈淡黄色或者黄绿色，质地较均匀；细胞 球状或近球状，细胞核大，细胞质浓 √非胚性愈伤：呈褐色、白色粉末状或白色、绿色坚硬 块状；细胞一般为长柱状等非规则形状，细胞核小， 细胞质较稀 A 实验二 三实验材料与用品 1、实验材料：棉花材料YZ1 2、用具：超净工作台，显微镜，载玻片，镊子， 酒精灯，培养皿，滤纸，解剖刀 3、药品：诱导培养基，卡宝品红染色液，1M盐酸 实验二 四. 实验内容 (一)棉花愈伤组织的诱导 (二)愈伤组织继代(第八周) (三)愈伤组织的观察 实验二 五、实验步骤 (一)棉花愈伤组织的诱导 1、愈伤诱导培养基的配制(第4周已做) 2、无菌苗的制备 3、无菌苗的切取 ·选取培养7天左右健壮的无菌苗置于垫有滤纸的培养皿上 ·用解剖刀切掉子叶及生长点，切掉胚根及相连的约1/4的下胚轴， 余下的下胚轴用作愈伤组织诱导的外植体 ·解剖刀将下胚轴切成～0.7cm小段 实验二 4、外植体接种及离体培养 将切离好的外植体接种于愈伤诱导培养基上(每瓶 约7段),平行放置，28℃光照培养，每天14小时 光照，进行愈伤组织诱导及增殖培养 实验二 (二)愈伤组织继代(第八周) 待外植体培养一个月左右，将增殖后的愈伤组织 连同下胚轴切断继代到新的诱导培养基上，进行 胚性愈伤组织的增殖及分化。 实验二 (三)愈伤组织的观察 ·非胚性愈伤观察：挑取少量非胚性愈伤置于载玻 片上，滴几滴清水用镊子捣碎愈伤组织，然后滴 加一滴卡宝品红染色数秒钟后，在显微镜下观察 ·胚性愈伤观察：挑取少量胚性愈伤组织，用1M的 盐酸解离5min,用蒸馏水冲洗3次，然后滴加一滴 卡宝品红染色数秒钟后，在显微镜下观察比较两 者细胞学特征 ·比较两者细胞学特征 实验二 五实验注意事项 1、在切无菌苗时，一定要使用锋利的刀片，尽 量做到一刀能切断，避免挤压茎段。 2、操作之前检查无菌苗的状态。 3、整个过程均为无菌操作环境 实验二 六实验结果 ·1.无菌苗的萌发及生长状况(有图为证) ·2.诱导过程的记录情况(有数据显示) · 3.愈伤的形态及细胞学观察情况(图片及描述)