阳离子交换树脂分离和富集莲子里黄酮类与生物碱类物质的研究.docxVIP

阳离子交换树脂分离和富集莲子里黄酮类与生物碱类物质的研究 采用现代分离纯度技术对植物中的不同有效成分组进行分离，然后进行药物筛选和试验。这是合理利用药物资源开发西药的重要手段之一。莲子心(Plumula Nelumubinis)为睡莲科莲属植物莲(Nelumbo nuciferaGaertn.)成熟种子中的绿色幼叶及胚根,是一种常用药材。莲子心中含有生物碱类、黄酮类等多种活性物质。生物碱类具有降血压、抗心律失常、抗血小板聚集、降血糖、逆转肿瘤多药耐药、抗氧化等药理活性;黄酮类物质主要为木樨草素、芦丁、金丝桃苷等,其具有抗氧化、清除自由基、抑制肿瘤细胞等药理作用。以往对莲子心的研究主要集中在生物碱类物质的提取分离纯化及药理活性,而对莲子心黄酮类物质的研究较少,未能将莲子心资源充分利用。因此,通过适当的分离方法对莲子心生物碱及黄酮类成分进行分离富集是非常有必要的。在充分分析莲子心生物碱类及黄酮类的结构和理化性质后,本文探讨了离子交换树脂用于莲子心生物碱和黄酮类物质分离富集的工艺条件。 1 a柱温箱、g3235a电极质谱检测 Agilent 1100高效液相色谱仪,包括G1311A四元梯度泵、G1313A自动进样器、G1311A柱温箱、G1315A二极管阵列检测器(安捷伦科技有限公司);甲基莲心碱对照品(自制,归一化法计算质量分数97%);莲心碱对照品(自制,归一化法计算质量分数98%);异莲心碱对照品(自制,归一化法计算质量分数98%);莲心黄酮Ⅳ对照品(自制,归一化法计算质量分数98%);莲子心提取液(制备方法见文献)。 2 方法和结果 2.1 条件1 2.1.1 流动相0.1%三乙胺-3-甲基苯磺酸酯b-3-甲基苯磺酸酯b的合成 色谱柱为Hypersil BDS C18柱(4.6 mm ×150 mm,5 μm),流动相为甲醇(B)-水(0.1%三乙胺)(A),梯度洗脱:0～5 min,60%～75%B;5～10 min,75%～80%B。检测波长282 nm,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃。 2.1.2 冰醋酸溶液a的制备 色谱柱为XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇(B)-0.2%冰醋酸溶液(A),梯度洗脱:0～40 min,30%～35%B;40～55 min,35%～35%B。进样量20 μL,流速0.8 mL/min,检测波长340 nm,柱温25 ℃。 2.2 上分层浸泡法 分别将001×1、001×7、001CC、D152四种阳离子交换树脂加2倍树脂体积的饱和食盐水浸泡24 h,然后放尽食盐水,用清水漂洗干净,使排出水不带黄色,搅动排出气泡,装入层析柱中。用3～4 BV 4% NaOH冲柱,浸泡2 h后放尽碱液,纯化水洗至近中性;用3～4 BV 5% HCl冲柱,浸泡4 h后放尽酸液,纯化水洗至近中性,备用。 2.3 莲心碱含量测定 以莲心黄酮Ⅳ和甲基莲心碱静态比吸附量及解析率为指标,对001×1、001×7、001CC、D152四种阳离子交换树脂进行考察。准确称取经预处理的树脂(湿树脂)5 g各两份,置于具塞三角瓶中,准确加入经澄清剂处理的莲子心提取液100 mL(药液比1∶10),静态吸附4 h;用纯水洗至洗脱液无色,抽干残留的溶液,放入具塞三角瓶中,准确加入70%乙醇50 mL,解析4 h,测定滤液中莲心黄酮Ⅳ含量;再准确加入NaCl饱和的70%乙醇溶液50 mL,解析4 h,测定滤液中甲基莲心碱含量;计算比吸附量及解析率,结果见表1。由以上结果可知,D152离子交换树脂对莲心黄酮Ⅳ和Nef的吸附量和解析率均较大。 2.4 静态吸附动力学 选择合适的树脂,除了需具有较大的吸附容量、吸附率和解析率外,还要有较快的吸附速率,仅仅以树脂的静态吸附率来评价其吸附性是不全面的。本实验对吸附率和解吸率均较好的D152树脂进行吸附动力学试验,绘制树脂的静态动力学曲线。取树脂5 g,置于具塞磨口三角瓶中,精密加入莲子心提取液(药液比为1∶10)100 mL,每隔10 min振摇1次,持续4 h,分别于10、20、30、40、50、60、90、120、180、240 min各取1 mL,测定其甲基莲心碱及莲心黄酮Ⅳ含量,绘制静态吸附动力学曲线,如图1所示。D152树脂对莲心黄酮N的吸附在3 h内基本达平衡,起始阶段的吸附量较大,大约需2 h,到2 h后吸附量较平缓;D152 树脂对Nef的吸附为快速平衡型,在3 h 内达平衡,起始阶段大约需1 h,吸附量较大,第Ⅱ阶段为慢速吸附过程,到2 h后,吸附量变化平缓。故在实际应用中,综合考虑生产周期,上柱液吸附2 h即可。 2.5 最大上样体积的确定 称取20.00 g(约30 mL)已处理好的树脂,纯化水湿法装柱(直径16 mm,高150