氧化还原酶的实验方法.docVIP

氧化还原酶的实验方法 1 （1）方法与原理 在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶促一元酚、二元酚或三元酚氧化成醌。以邻苯二 酚氧化成相应的二醌为例， CH(OH)+1/2O?CHO+HO(2) 试剂配制 1%邻苯三酚溶液，乙醚，0.5N盐酸，重铬酸钾标准溶液（0.75gKCrO溶于1L0.5N HCl），227pH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液 标准曲线绘制：取重铬酸钾标准溶液，用0.5N盐酸稀释成各种不同浓度。定容后，在 分光光度计上于430nm处比色测定。以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。 （3）操作步骤 取1g鲜土（过2mm筛），置于50ml三角瓶中，然后注入10ml1%邻苯三酚溶液，摇荡后放在30。C恒温箱中培养2h。(为了减少误差，建议以下操作在冰盘上进行)取出后加4mlpH4.5柠檬酸----磷酸缓冲液，再加35ml乙醚，用力振荡数次，萃取30min。最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相进行比色。比色时用波长为430nm的滤光片，为防止因乙醚引起的误差，每比色一次用无水乙醇洗涤比色液槽一次。 为了消除土壤中原有的醚溶性有机物质而引起的误差及校正没食子酚的纯度，需设无基 质的土壤和无土壤的基质作对照。在无基质的土壤对照中，用水代替基质进行培养。 （4）活性表示 紫色没食子素的量，根据用重铬酸钾绘制的标准曲线查知。 多