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分⼦⽣物学题库3 七、问答题 1．阐述原核⽣物的转录终⽌。 (1)转录终⽌的两种主要的机制是什么? (2)描述翻译怎样能调节转录终⽌。 (3)为什么在细菌转录终⽌中很少涉及到Pho因⼦? (4)怎样能阻⽌转录的终⽌? 2．复制 DNA 的聚合酶(DNA 依赖的 DNA 聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA 聚合酶没有这种功能。3．讨论原核⽣物基因 表达的聚合作⽤反应定向的重要性。假如核糖体从3’端到5’端读它的模板 mRNA 的话，那么将会发⽣什么情况? 4．概括细菌细胞的转录过程。 5.概括典型原核⽣物启动⼦的结构和功能，并解释什么是保守序列。 6．转录如何在基因或基因组末端终⽌? 7．(1)如何区分由启动⼦起始转录的RNA ⽚段与5’端被加⼯过的RNA ⽚段; (2)证明多肽是从氨基端到羧基端⽅向合成的。 8．⽐较E ．coli rRNA和 tRNA的转录和加⼯。 9．区别可诱导和可阻遏的基因调控。 10．衰减作⽤如何调控E. coli中⾊氨酸操纵⼦的表达? 11．⽐较并指出细菌和真核⽣物RNA 翻译机理的异同。 12．什么是摇摆假说? 13．指出E.coli和真核⽣物翻译起始的不同。 14．S ．N Cohen于1973年构建了三个重组体， pSC102， pSC105， pSC109请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了 什么? 15．基因克隆是如何使含有单个基因的DNA ⽚段得到纯化的? 16．什么是细菌的限制— 修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system) 17．细菌的限制— 修饰系统有什么意义? 18．说明限制性切核酸酶的命名原则要点。 19．Ⅰ类限制酶具有哪些特点?在基因⼯程中有什么作⽤? 20．Ⅲ类限制酶有哪些特点? 21．何谓限制性切核酸酶的切割频率? 22．什么是限制性切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响? 23．双酶消化法(double digests)绘制限制性切核酸酶酶谱的原理。 24．什么是 DNA 多态性(DNA polymorphism)? 25．限制性⽚段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)。 26．计算下列三种酶各⾃在某染⾊体 DNA序列上识别位点间的平均距离： AluⅠ：5’AGCT 3”Eco RⅠ: 5’GAATTC 3’ 3 TCGA 5’ 3’CTTAGG 5’ AcyⅠ:5’GPuCGPyC 3’ 3’CPyGCPu5’ (注： Py=任何⼀种嘧啶； Pu=任何⼀种嘌呤) 27．在细菌质粒 pBP1的四环素抗性基因 tet R 的中间有⼀个HindⅡ的切点。⽤HindⅢ切割果蝇基因组DNA，以 pBP1为载体构 建基因组⽂库。分⼦杂交证明克隆15带有果蝇的⽬的基因。⽤HindⅢ和Eco RV 对克隆15进⾏了酶切分析，电泳结果如图 15.1(⽤酶切的 pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了⽚段的⼤⼩。 (1)绘制含有插⼊⽚段和不含插⼊⽚段时的 pBPl 的限制性图谱，并标明四环素抗性基因的位置—; (2)如果⽤克隆在另⼀个与 pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进⾏ Southern印迹 杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带? (3)如果⽤克隆15的果蝇 DNA⽚段作为探针进⾏ Southem印迹杂交，放射⾃显影的结果⼜是如何? 28．为什么⼤多数切酶被称 为“限制”酶。 29．据Science杂志报道:⼀种重要的遗传疾病可由导致 DNA 中碱基替换的诱变剂在体外进⾏⼈⼯诱导。 设计⼀种快速⽤以鉴定疾病基因型的检测⽅法。 30．为了绘制长为3.0kb Bam H Ⅰ限制性⽚段的限制性图谱，分别⽤Eco R Ⅰ、Hpa ⅡEco R Ⅰ⼗HpaⅡ消化这⼀⽚段的三个样 品，然后通过凝胶电泳分离 DNA⽚段，溴化⼄锭染⾊后观察DNA带型(图15.2)。 请根据这些结果，绘制⼀个限制性图谱，要标明E.co R Ⅰ和HpaⅡ识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。 31．1967年，有5个实验室⼏乎同时独⽴发现了DNA 连接酶，每个实验室的实验有什么特点? 32．简述 DNA和RNA连接酶的催化反应机制。 33. 影响 DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些? 34．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因⼯程中有什么作⽤? 35. 如何利⽤ T4 DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端? 36. 如何利⽤ T4 DNA聚合酶进⾏双链 DNA 的3’末端标记? 37．如何利⽤ T4 DNA聚合酶制备平末端? 38．反转录酶