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基因工程试题及答案 1简述基因工程的定义和现代生物技术的内容 基因工程是利用DNA体外重组或PCR扩增技术从某种生物基因组中分 离感兴趣的基因，或是用人工合成的方法获取基因，然后经过一系列切割， 加工修饰，连接反应形成重组DNA分子，再将其转入适当的受体细胞，以 期获得基因表达的过程. 现代生物技术的内容：基因工程技术、蛋白质工程技术、细胞（组织） 工程技术、酶工程技术、发酵工程技术 2请简述基因工程中使用的主要酶类和它们的功能限制性内切酶—主 要用于DNA分子的特异切割DNA 甲基化酶—用于DNA分子的甲基化核酸酶 —用于DNA和RNA 的非特异性切割核酸聚合酶—用于DNA和RNA 的合成核 酸连接酶—用于DNA和RNA 的连接 核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA 的末端修饰 其它酶类--用于生物细胞的破壁，转化，核酸纯化，检测等3载体必 备的功能元件是什么，各有什么功能 至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制。至少应 有一个克隆位点，以供外源DNA插入。至少应有一个遗传标记基因，以指 示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞。 4何为 α互补，它在载体构建中有何作用 β—半乳糖苷酶基因有1021AA，基因产物不具酶活性，装配为四聚 体后才有酶活。该蛋白质可分为两部分：α链和 β链。前者负责四聚体 装配，后者具 β—半乳糖苷酶活性；只有当两者都存在时，才会表现出 酶活性，该作用称之为 α-互补作用。这两个部分可独立存在，分别由两 个基因编码。为 α链编码的基因称之为lacZα(编码145AA)。这两个基 因（LacZ和LacZα）均可作为标记基因。通过其是否具有 β—半乳糖苷 酶活性作为构建载体的筛选标志。 β—半乳糖苷酶基因的优点: a.酶催化某-Gal水解为兰色产物，检测直观 b.lacZα编码5-端可容许很大的变化而不影响酶活性c.lacZα和 β链基因的分别表达可使载体小而容量大 5简述利用T7噬菌体启动子的pET系列表达载体的工作原理。 pET载体及其表达系统pET-5a：在载体的基本结构上加入了T7噬菌 体启动子序列及其下游的几个酶切位点。当外源基因插入到这些酶切位点 后，就可在特定的宿主细胞中诱导表达。T7噬菌体启动子：只能由T7噬 菌体的RNA聚合酶识别并启动转录，而大肠杆菌的RNA聚合酶不能作用于 T7噬菌体启动子。用于表达的宿主细胞必须能表达T7噬菌体的RNA聚合 酶。常用的pET表达载体的宿主菌：大肠杆菌BL21 （DE3）。通过宿主控 制T7RNA聚合酶的量来实现的，即在宿主细胞中引入一个带有T7噬菌体 的溶菌酶编码基因的质粒，如pLyS或pLyE，它们分别低量和高量表达T7 噬菌体的溶菌酶。该溶菌酶可抑制T7RNA聚合酶的活性，从而减少在未诱 导情况下外源基因的表达。使启动子的控制效应更严谨。在pET载体上装 载lacⅠ基因，提高阻抑物的浓度。可利用T7-lac启动子（在T7启动子 序列下游装入一个由25bp组成的lacO操纵子序列），当阻抑物结合在 lacO位点时，即使存在T7RNA聚合酶，外源基因也无法表达。只有当诱 导物存在时，才能解开T7RNA聚合酶基因和外源基因表达的双重阻遏。6 请简述PCR 引物设计的要点 ①长度：至少16bp，通常为18-30bp，更短的引物一般会降低扩增的 特异性，但会提高 扩增的有效性。 ②引物的解链温度：两个引物之间的Tm值差异最好在2-5℃对于小 于20个碱基的引物其Tm值可用简易公式计算，即Tm=4 （G+C）+2 （A+T）。对于14-70个核苷酸的引物可用以下公式计算。 Tm=81.5+16.6 （1g[K+]）+0.41 （G+C）%- （675/N） N表示引物的核苷酸数目，[K+]表示单价离子即钾离子的浓度。③避 免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基），从而减少引物二聚体 的形成以及引物内部二级结构的形成。 ④G+C含量：尽量控制在40%至60%之间，4种碱基的分布应尽可能均 匀。尽量避免嘌呤或嘧啶的连续排列，以及T在3末端的重复排列。⑤ 引物的3末端最好是G或C，但不要GC连排。7请简述DNA诱变的种类 和特点 一、随机诱变特点：不需要有序列针对性的设计，引起突变的位置及 性质是随机的。随机诱变的关键和策略，选择合适的突变频率：目的基因 中有1.