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全蝎蛋白药效组分的电泳鉴别法研究 蝎子是蝎子科动物，在中国广泛分布。现已经证明,全蝎具有息风镇痉、攻毒散结、通络止痛等功效。目前对全蝎蝎毒中的多肽和蛋白质研究比较多,但对全蝎中的蛋白质研究较少,《中国药典》在全蝎的质量方面也仅测定其醇溶性浸出物的总含量。本文在中医临床用药的指导下,通过对全蝎药材中蛋白药效组分的提取、含量测定与电泳分析,探讨全蝎蛋白药效组分的生物鉴定法。 1 德国基金属酶学试剂 全蝎药材均购自河北安国药材市场,由北京中医药大学张贵君教授鉴定为正品。 离心机(BECKMAN,美国);精密分析天平(Sartorius,德国);超净工作台(ESCO,新加坡);DYCZ-24 E电泳槽(北京六一仪器厂);Universal电泳仪(BIO-RAD);USA MILLIPORE反渗纯水仪(上海新美生物技术研究所)。牛血清白蛋白,BSA(美国,Millipore);考马斯亮蓝R-250(进口分装,国药集团化学试剂有限公司);丙烯酰胺(北京华瑞新成科技有限公司);甲叉双丙烯酰胺,十二烷基硫酸钠,SDS(北京化学试剂公司)。 2 方法 2.1 总蛋白的提取 将全蝎用烘箱于30℃烘干。取20.05 g全蝎经粉碎机粉碎,加入300m L蒸馏水,磁力搅拌器温和搅拌(30℃),约4 h溶液呈过饱和状,将溶液静置分层,取出上层淡黄色提取液,经在4~10℃条件下8 000 r·min-1离心1